品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC0025 |
规格 | 100管/96样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 丙二醛(MDA)含量检测 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
丙二醛(MDA)含量检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0025
规格:100T/96S
产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体42 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×2瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 液体12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
MDA检测工作液的配制:临用前取1瓶试剂二加入20mL试剂一,溶解混匀,2-8℃保存一个月。MDA检测工作液较难溶解,可以70℃加热,并剧烈振荡以促进溶解,或者通过超声处理以促进溶解。
产品说明:
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸,生成过氧化脂质;后者逐渐分解为一系列复杂的化合物,其中包括丙二醛(MDA)。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。
丙二醛(MDA)在酸性和高温条件下,可以与硫代巴*(thiobarbituric acid,TBA)缩合,生成棕红色的三甲川(3,5,5-三甲基恶唑-2,4-*酮),其最大吸收波长在532nm。进行比色后可估测样本中MDA的含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体操作步骤详见“产品资料"附件
实验实例:
取马血清按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA532=A532测定-A532空白=0.078-0.047=0.031,ΔA600=A600测定-A600空白=0.053-0.043=0.01,ΔA=ΔA532-ΔA600=0.021按体积计:
MDA含量(nmol/mL)=53.763×ΔA×F =1.129 nmol/mL。
取500万hela细胞,加1mL提取液进行样本处理,离心取上清后按测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA532=A532测定-A532空白=0.101-0.046=0.055,ΔA600=A600测定-A600空白=0.043-0.043=0,ΔA=ΔA532-ΔA600 = 0.055,按照细菌或细胞数量计算:
MDA含量(nmol/104 cell)=0.1075×ΔA×F =0.006nmol/104 cell
取0.1g 小鼠肝脏,加1mL提取液进行样本处理,离心取上清后按测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA532=A532测定-A532空白=0.196-0.047=0.149,ΔA600=A600测定-A600空白=0.125-0.043=0.082,ΔA=ΔA532-ΔA600= 0.067,按照样本质量计算:
MDA含量(nmol/g 质量)= 53.763×ΔA÷W×F =36.02 nmol/g 质量
参考文献:
[1] Spitz D R , Oberley L W . An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry,1989
[2] Masayasu M , Hiroshi Y . A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta.
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