中性转化酶（NI）活性检测试剂盒 蔗糖

中性转化酶（NI）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC0575
规格：100T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。 溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入20mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
2、标准品：10mg葡萄糖，临用前加入1mL蒸馏水溶解,制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。
产品说明：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，将高等植物Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。NI主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
NI催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
“具体操作步骤详见“产品资料"附件"
注意事项：

1. 如果加入试剂三，煮沸10min后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度；

2. 如果吸光值大于1，可以用蒸馏水将样本稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）。

3. 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

实验实例：

1. 取0.1g冬青加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清稀释2倍后按照步骤操作，用96孔板测得计算A测定=0.686，A对照=0.599，ΔA=A测定-A对照=0.686-0.599=0.087，带入标准曲线y = 0.7035x + 0.0263， 计算x=（0.087-0.0263）/0.7035=0.086，按样本质量计算酶活得：

NI活性（U/g 质量）=33.3 ×x÷W×稀释倍数=33.3 ×0.086÷0.1×2=57.276 U/g 质量。
参考文献：

1. Huang Y W, Nie Y X, Wan Y Y, et al. Exogenous glucose regulates activities of antioxidant enzyme, soluble acid invertase and neutral invertase and alleviates dehydration stress of cucumber seedlings[J]. Scientia horticulturae, 2013,162: 20-30.

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