土壤FDA水解酶活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0480

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取1支加1.5 mL丙酮溶解，用不完的-20℃分装保存一周，避免反复冻融；

2、 标准品：10 mg荧光素，临用前加入3.03 mL 50%丙酮（丙酮（V）：蒸馏水（V）=1:1）配成10 μmol/mL的荧光素标准溶液，可45℃水浴促进溶解，-20℃分装保存两周，避免反复冻融。

产品说明：

FDA水解反应能很好的反应土壤中微生物活性和土壤质量的变化以及生态系统中有机质的转化，是土壤质量研究中的重要生物学指标之一。

FDA是一种无色化合物，在介质中能被许多土壤酶所催化水解，并经脱水反应，产生酶解终产物荧光素，稳定不易被分解，并在490nm处有强吸收峰，通过检测490nm处的吸光值变化可计算得FDA水解酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、台式离心机、恒温水浴锅/恒温培养箱、丙酮（不可快递）、研钵、30-50目筛。

三、FDA水解酶活性计算

酶活性定义：每克土壤每天产生1μmol 荧光素的量为一个酶活力单位。

FDA活性（U/g 土样）=（ΔA测定÷ΔA标准×C标准品）×V反总÷W ÷T=48×（ΔA测定÷ΔA标准）÷W

C标准品：标准品浓度 2μmol/mL；V反总：反应总体积，1mL；W：样本质量，g；T：反应时间，1h=1/24d。

注意事项：

1. 尽量采用新鲜土样或者短期低温保存样本，否则很难准确反映酶的活性。

2. 测定之前进行预实验，若吸光值大于1.2，可适当减少土样质量再测定。若吸光值过小，可增加土样质量或增加反应时间来进行测定。

实验实例：

1、 分别取两管0.1g三叶草土于1.5mLEP管中，分别为对照管及测定管，按照测定步骤操作，取上清稀释5倍进行测定，用1mL玻璃比色皿测定吸光值，计算ΔA测定=A测定-A对照=1.148-0.066=1.082，ΔA标准=A标准-A空白=0.499-0=0.499，按土壤质量计算酶活得：

FDA活性（U/g 土样）=48×（ΔA测定÷ΔA标准）÷W×5（稀释倍数）= 5204.01 U/g 土样。

2、 分别取两管0.1g林土于1.5mLEP管中，分别为对照管及测定管，按照测定步骤操作，取上清稀释5倍进行测定，用1mL玻璃比色皿测定吸光值，计算ΔA测定= A测定-A对照=0.973-0.133=0.84，ΔA标准=A标准-A空白=0.499-0=0.499，按土壤质量计算酶活得：

FDA活性（U/g 土样）=48×（ΔA测定÷ΔA标准）÷W×5（稀释倍数）= 4040.08 U/g 土样。

参考文献：

[1] Sánchez-Monedero M A, Mondini C, Cayuela M L, et al. Fluorescein diacetate hydrolysis, respiration and microbial biomass in freshly amended soils[J]. Biology and Fertility of Soils, 2008, 44(6): 885-890.

[2] Paudel B R, Udawatta R P, Anderson S H. Agroforestry and grass buffer effects on soil quality parameters for grazed pasture and row-crop systems[J]. Applied Soil Ecology, 2011, 48(2): 125-132.

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