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产品名称:

人白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 2600
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2020-04-29
Solarbio ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。人白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒是将抗人IL-6单克隆抗体包被在酶标板上;分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本;洗板后加入生物素化抗人 IL-6抗体;洗板后加入HRP标记的链霉亲和素,洗板后加入显色剂底物 TMB;后,在λmax=450 nm处测定反应孔样品吸光度,通过计算出样本中人IL-6的浓度。​

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号SEKH-0013
规格96T/48T供货周期现货
主要用途人白细胞介素6 含量测定应用领域医疗卫生,环保,化工,生物产业,农业
 

人白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒

注意事项:

1. 试剂盒应在有效期内使用,请不要使用过期的试剂。

2. 试剂盒未使用时应保存在2-8℃冰箱,已复溶但未用完的标准品,请丢弃。

3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30 min,且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。

4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测,且加入试剂的顺序应保持*。

5. 为避免交叉污染,请在试验中使用 1 次性试管,枪头,封板膜(※)及洁净塑料容器。.

6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少,在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶 盖上,使用前请离心处理(5-10 S 即可),使管壁上的液体集中在管底部,取用时,请用移液器小心吹 打几次。

7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外,请不要使用其他来源试剂盒内含的 试剂代替本试剂盒中的某单个组分。

8. 为保证结果准确,每次检测均需做标准曲线。


安全提示: 试剂盒中的终止液为酸性溶液,操作人员在使用时请带上手套并注意防护;在操作过程中也要避免试 剂接触皮肤和眼睛,如果不慎接触,请用大量清水清洗;检测血液样本及其它体液样本时,请按国家生物 实验室安全防护有关管理规定执行。
 

试剂盒组成及储存:



 

自备实验器材(不提供,可代购)

1. 酶标仪(主波长450nm,参考波长 630nm)

2. 高精度移液器及一次性吸头:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3. 洗板机或洗瓶

4. 37℃孵育箱

5. 双蒸水,去离子水,量筒等 
 

人白细胞介素6(IL-6)ELISA试剂盒

样本收集及储存:

1. 细胞培养上清: 将细胞培养基移无菌离心管,在 4℃条件下 1000 ×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并 于-20℃下保存(24 小时内检测可放入

2-8℃储存),避免反复冻融。

2. 血清样本: 室温血液自然凝固 20 min 后,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),保存过程中如有沉淀,请再次离心,避免反复冻融。

3. 血浆样本: 将全血收集到含抗血凝剂的管中,根据标本的实际要求选择 EDTA,柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混 合 20 min,在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小时内检测可放入 2-8℃储存),避免反复冻融。


※注意:血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本,以免影响检测结果;如果样本中的靶标物检测浓度高 于标准品的值,请将样品做适当倍数稀释后检测,建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。
 

人白细胞介素6

试剂准备:

 

1. 试剂回温:先在实验前 30 min 将试剂盒,待测样本放置于室温下,浓缩洗涤液如出现结晶,请放入 37℃温浴直到结晶全部溶解。

2. 配制洗涤液:预先计算好稀释后的洗涤液使用体积,然后用双蒸水或去离子水将 20 倍浓缩洗涤液稀释 成 1 倍应用液,未用完的浓缩洗涤液放入 4℃冰箱保存。

3. 标准品梯度稀释:加入标准品/样本稀释液(SR1)1ml冻干标准品中,静置15分钟待其完全溶解后轻 轻混匀(浓度为2000pg/ml),然后在其余七管中各加入500mL标准品/样本稀释液(SR1),按照以下浓度 进行2倍稀释:1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62 pg/ml进行稀释。500pg/ml为标准曲线点 浓度,标准品/样本稀释液(SR1)作为标准曲线的零点(0pg/ml)。复溶过的标准品原液(2000pg/ml) 未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装,并将其贮存在-20~-80℃冰箱,具体如下图。



 

4. 生物素化抗体工作液:预先计算好试验所需用量,用检测稀释液(SR2)将100倍抗体浓缩液稀释成1倍 应用工作液(稀释前充分混匀),请在30分钟内加入到反应孔中。



 

5. 酶结合物工作液:按每次试验所需用量配制,用酶结合物稀释液(SR3)将100倍浓缩酶结合物稀释成1 倍应用工作液(稀释前离心),请在30分钟内使用。


 

IL-6 Human ELISA Kit结果判断:

1.用酶标仪 450 nm波长测定 OD 值。选择双波长检测,参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测,请 用 450 nm 的 OD 测定值减去 630 nm 的 OD 测定值。

2.计算标准品、样品的平均OD 值:每个标准品和标本的 OD 值应减去零孔的 OD 值

3.以标准品浓度为横坐标,吸光度OD值为纵坐标,用软件绘制标准曲线,样品中TNF-α含量可通过对应OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。

4.若标本 OD 值高于标准曲线上限,应做适当稀释后重新检测,计算浓度时再乘以稀释倍数.
 

 

参数表征:



 

1. 数据及标准曲线



2. 灵敏度: 低可检测人 TNF-α浓度达 8pg/ml, 20 个零标准品浓度 OD 的平均值加上两个标准差,计算相应的可检测浓度。
3. 特异性: 不与人 TNF-β,GM-CSF,s TNFRI,s TNF RII 反应,小鼠 TNF-α,s TNF RI
4. 重复性: 板内,板间变异系数<10%。
5. 回收率: 在选取的健康人血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的人 TNF-α,计算回收率。



6. 线性稀释: 分别在选取的 4 份健康人血浆和细胞培养上清中加入高浓度人 TNF-α,在标准曲线动力学范围内进行稀 释,评估线性.



 

参考文献:

1. Hirano, T. et al. (1984) J. Immunol. 133:798.
2. Kikutani, H. et al. (1985) J. Immunol. 134:990.
3. Hirano, T. et al. (1986) Nature 324:73.
4. Haegeman, G. et al. (1986) Eur. J. Biochem. 159:625.
5. Van Snick, J. et al. (1988) Eur. J. Immunol. 18:193.
6. .Lotz, M. et al. (1988) J. Exp. Med. 167:1253.
7. Hirano, T. et al. (1990) Immunol. Today 11:443.
8. Hirano, T. et al. (1990) in Peptide Growth Factors and their Receptors I, Sporn, M.B.and A.B.Roberts eds., Springer-Verlag, New York, p. 663.
9. Kishimoto, T. et al. (1992) Science 258:5593.
10. Hirano, T. (1992) Clin. Immunol. Immunopathol. 62:S60.

 

常见问题及解决方法:

问题

可能原因

解决方法

高背景或阴性 对照值偏高

洗板不充分

将洗涤液注入反应孔充分洗涤,彻底拍干孔中液体

酶结合物过量

检查酶稀释度,按说明书标识的稀释度稀释

底物污染

加底物前检查底物是否为透明无色,请勿用变蓝的底物,重 新用新的底物试验

阴性对照孔被阳性对照 污染

注意洗涤时不要把洗液溢出孔外,不使阴阳对照孔液体涟接 一起

不同批次试剂混用

检查试剂批号,请勿用不同批次试剂

显色信号弱

试剂过期

检查试剂盒有效期,请勿用过期试剂

孵育时间过短

按说明书中规定的时间孵育

试剂污染

检查试剂是否污染,请勿用污染的试剂

酶标仪滤光片不匹配

检查酶标仪设置及滤光片是否匹配

试剂盒平衡不充分

确保试剂盒试验前平衡室温

显色时间不够

增加底物显色时间

无显色信号

检测抗体、酶、或显色 剂漏加

检查试验操作流程,重复试验

酶被叠氮钠污染

请使用重新配制的试剂

试剂添加顺序有误

检查复核试验添加顺序、流程,重复试验

标曲佳但样品 孔无信号

样品中靶标物含量低或 样品中无靶标物

设置阳性对照,重复实验

样品基质效应影响检测

重新稀释样品后复测

标曲佳但样品 信号偏高

样品中待检物含量超过 标准曲线范围

重新稀释样品后复测

边缘效应

孵育温度不均衡

孵育时每步均使用新的封板胶纸,避免在环境温度变化大的 地方孵育,勿叠放反应板

 参考文献:
《iTRAQ‐Based Proteomic Analysis Exploring the Influence of Hypoxia on the Proteome of Dental Pulp Stem Cells under 3D Culture》 作者:Lei Dou  Qifang Yan  Panpan Liang  Pengfei Zhou  Yan Zhang  Ping Ji 期刊:Proteomics 影响因子:3.106 PMID:29327447
《Some cardiac marker levels and cytokines in diabetic patients》 作者:Esmail S. Kakey and Shahen S. Hussen 期刊:International Conference on Pure and Applied Sciences 影响因子: PMID:
《Effect of blood purification on serum miR-126 and VEGF levels in the process of atherosclerosis in uremic patients under maintenance hemodialysis》 作者:Dong Zhao,Hong Shao 期刊:The Kaohsiung Journal of Medical Sciences 影响因子:1.291 PMID:30041762
《Release of mitochondrial DNA correlates with peak inflammatory cytokines in patients with acute myocardial infarction.》 作者:Chaoyi Qin, Jun Gu, Ruiqi Liu, Fei Xu , Hong Qian, Qian He, Wei Meng 期刊:Anatol J Cardiol 影响因子:1.112 PMID:27721319

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