品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC3100 |
规格 | 50T/24S | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 土壤硝酸还原酶(S-NR)活性检测 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
土壤硝酸还原酶(S-NR)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号:BC3100
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体30 mL×1瓶 | -20℃保存 |
试剂二 | 液体5 mL×1瓶 | -20℃保存 |
试剂三 | 液体5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体10 mL×1瓶 | -20℃保存 |
试剂五 | 液体25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 液体25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1 mL×1支 | -20℃保存 |
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、恒温水浴锅/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或37 度烘箱风干,过30~50目筛。
二、测定步骤
分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。
NaNO2标准液的配制:用蒸馏水将标准品稀释0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL。
标准品稀释表:
序号 | 稀释前浓度(µmol/mL) | 标准液体积(µL) | 蒸馏水体积(µL) | 稀释后浓度(µmol/mL) |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
3 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
4 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
5 | 1 | 40 | 160 | 0.2 |
6 | 1 | 20 | 180 | 0.1 |
备注:实验中每个标准管需100µL标准溶液
样本测定:
试剂名称 | 1.5mLEP管 | |||
测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 | |
风干土样(g) | 0.1 | 0.1 | ||
NaNO2标准液(μL) | 100 | |||
蒸馏水(μL) | 100 | 100 | 100 | |
试剂一(μL) | 365 | 365 | 365 | 365 |
试剂二(μL) | 35 | 35 | 35 | |
混匀后,置于37℃水浴锅/恒温培养箱反应24h。 | ||||
试剂三(μL) | 50 | 50 | 50 | 50 |
试剂二(μL) | 35 | |||
立刻混匀, 8000rpm室温离心5min | ||||
上清液(μL) | 400 | 400 | 400 | 400 |
试剂四(μL) | 100 | 100 | 100 | 100 |
混匀后,置于37℃水浴锅/恒温培养箱保温20min。 | ||||
试剂五(μL) | 250 | 250 | 250 | 250 |
试剂六(μL) | 250 | 250 | 250 | 250 |
混匀,显色20min后,520nm下读取各管吸光值,分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。计算ΔA测定=A测定- A对照,ΔA标准=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需检测1-2次。
三、S-NR活性计算
1、标准曲线绘制:
以0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL标准溶液为横坐标(x轴),ΔA标准为纵坐标(y轴)绘制标准曲线,得到线性回归方程y=kx+b,将ΔA测定代入方程得到x(μmol/mL)。
2、S-NR活性计算:
单位的定义:每g土样每天中产生1μmol NO2ˉ的量为一个 S-NR活力单位。
S-NR(U/g 质量)=x×V标准÷W÷T=0.1x÷W
V标准:反应体系中加入的标准液体积,0.1mL;W:风干土样,g;T:反应时间,1d。
注意事项:
试剂一、试剂二和试剂四在冰上放置,用不完的试剂-20℃分装保存,避免反复冻融。
ΔA测定过小(小于0.01),可延长反应时间(37℃水浴时间)。
当ΔA大于1时,可以将上清液用蒸馏水稀释后,再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。
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