品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
---|---|---|---|
分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC5925 |
规格 | 100T/96S | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 果糖激酶(FRK)活性检测 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
果糖激酶(FRK)活性检测试剂盒说明书
微量法
货号:BC5925
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体110mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
粉剂一 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
试剂三 | 液体3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体8μL×2支 | -20℃保存 |
试剂六 | 粉剂×2支 | -20℃保存 |
溶液的配制:
1. 提取液:临用前将粉剂一溶于提取液中;该试剂为悬浊液,使用前摇匀即可,2-8℃保存12周;
1. 试剂一:试剂放于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入2.667mL蒸馏水,充分溶解。溶解后的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融;
2. 试剂二:试剂放于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入3.03mL蒸馏水,充分溶解。溶解后的试剂-20℃分装保存4周,避免反复冻融;
3. 试剂三:试剂放于试剂瓶内玻璃瓶中,临用前加入6mL蒸馏水溶解,溶解后的试剂2-8℃分装保存4周;
4. 试剂五工作液:临用前根据样本数量按照试剂五:蒸馏水=8μL:1000μL(共1008μL,约100T)的比例配制,充分混匀,现配现用;为了延长使用时间,此产品多给1支。
5. 试剂六:临用前取一支试剂六加入1mL蒸馏水,充分溶解。溶解后的试剂-20℃分装保存2周,避免反复冻融。(该试剂为冻干试剂,可能存在不同瓶间肉眼观察试剂量相差较大甚至量很少的现象,此现象不影响使用,实际质量相同)
产品说明:
果糖激酶(Fructokinase,FRK,EC 2.7.1.4)是催化果糖磷酸化的主要酶。果糖激酶可以作为植物的己糖感受器和信号分子,通过影响植物的生长周期来调控植物的代谢和生长发育进程,果糖磷酸化对于维持淀粉生物合成方向具有重要意义。
FRK催化果糖合成6-磷酸果糖,6-磷酸果糖在磷酸己糖异构酶的作用下异构为6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADH,NADH在340nm有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、分析天平、水浴锅/恒温培养箱、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤:具体的操作步骤请见“产品资料"文件
注意事项:
1. 如果∆A小于0.005,可以增加样本量或延长反应时间再进行测定;如果∆A测定大于0.6或A1测定小于A1空白,建议将样本稀释或者缩短反应时间再进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例:
1. 取0.1023g土豆组织样本,加入提取液进行冰浴匀浆,离心后取上清,按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算:ΔA测定=A2测定-A1测定=0.137-0.080=0.057,ΔA空白=A2空白-A1空白=0.001-0.001=0,ΔA=ΔA测定- ΔA空白=0.057。按样本质量计算得:
FRK活性(U/g 质量)=321.54×ΔA÷W = 179.157U/g 质量。
2. 取0.06g酵母粉,加入提取液进行冰浴匀浆,离心后取上清,按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算:ΔA测定=A2测定-A1测定=0.705-0.202=0.503,ΔA空白=A2空白-A1空白=0.001-0.001=0,ΔA=ΔA测定- ΔA空白=0.503。按样本质量计算得:
FRK活性(U/g 质量)=321.54×ΔA÷W =2695.58U/g 质量。
参考文献:
[1] Giroix M H, Jijakli H, Courtois P, et al.Fructokinase activity in rat liver, ileum, parotid gland, pancreas, pancreatic islet, B and non-B islet cell homogenates.[J].International Journal of Molecular Medicine, 2006, 17(3):517-522.
[2] Kurt, Bergbauer, Ralf, et al. Studies on Fructose Metabolism in Cultured Astroglial Cells and Control Hepatocytes: Lack of Fructokinase Activity and Imrrunoreactivity in Astrocytes[J].Developmental Neuroscience, 2009, 18(5-6):371-379.
[3] Schaffer A A, Petreikov M. Inhibition of fructokinase and sucrose synthase by cytosolic levels of fructose in young tomato fruit undergoing transient starch synthesis[J].Physiologia Plantarum, 2010, 101(4):800-806.
相关系列产品:
BC0740/BC0745 己糖激酶(HK)活性检测试剂盒
BC0530/BC0535 磷酸果糖激酶(PFK)活性检测试剂盒
BC2190/BC2195 磷酸烯醇式丙 酮酸羧化酶(PEPC)活性检测试剂盒
BC2450/BC2455 植物组织果糖(FT)含量检测试剂盒
果糖激酶(FRK)活性检测试剂盒 微量法 果糖激酶(FRK)活性检测试剂盒 微量法