品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | CAS | 详询 |
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分子式 | 详询 | 纯度 | 详询 |
分子量 | 详询 | 货号 | BC0695 |
规格 | 100T/96S | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 葡萄糖氧化酶酶活测定 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农业,综合 |
葡萄糖氧化酶(GOD)测试盒
微量法
货号:BC0695
规格:100T/96S
产品内容:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 3mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 1mL×1 支,-20℃保存,融化后可分装保存。
产品说明:
GOD(EC 1.1.3.4)广泛存在于动物和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生 H 2 O 2 ,是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
GOD 催化葡萄糖产生 H 2 O 2 ,过氧化物酶在有氧存在时催化 H 2 O 2 分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
需自备设备跟仪器
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
操作步骤
一、 样品测定的准备
1、组织处理:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆):直接检测。
二、 测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长 500nm,蒸馏水调零。
2、GOD 工作液的配制:取 15mL 试剂一加 3mL 试剂二混匀,调 PH 5.1(现配现用)。
3、加样表:
试剂名称(μL) 测定管
GOD 工作液 174
试剂三 6
混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min
样本 20
样品测定前将 GOD 工作液与试剂三放入 37℃水浴中保温,然后将上述试剂按顺序加入微量比
色皿/96 孔板中,加样本的同时开始计时;在 500 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 及 1 分20 秒时的吸光度 A2。计算 ΔA=A2-A1。
三、GOD 活力单位的计算
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、动物组织 GOD 活力的计算
(1)按蛋白浓度计算
单位的定义 :每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=1333×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W÷V 提取×V 样)÷T=1333×ΔA÷W
2、血清(浆)GOD 活力的计算
单位的定义 :每 mL 血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/mL)=ΔA÷d÷ε×V 反总÷T÷V 样本=1333×ΔA
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样本:加入样本体积,0.02mL;V 提取,加入提取液体积,
1mL;cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;d:光径,1cm;ε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10 -3 mL/μmol/cm;T:反应时间,1min。
b.用 用 96 孔板测定的计算公式如下
1、动物组织 GOD 活力的计算
(1)按蛋白浓度计算
单位的定义 :每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=2222×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/g 鲜重)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W÷V 提取×V 样)÷T=2222×ΔA÷W
2、血清(浆)GOD 活力的计算
单位的定义 :每 mL 血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/mL)=ΔA÷d÷ε×V 反总÷T÷V 样本=2222×ΔA
V 反总:反应总体积,0.2mL;V 样本:加入样本体积,0.02mL;cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;
W:样本鲜重,g;d:光径,0.6cm;ε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10 -3 mL/μmol/cm;T:反应时间,1min。
1、不同匀浆组织中 GOD 活力不一样,做正式试验之前请做 1-2 只预试,若 A2-A1>1,
则说明组织活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液,使 A2-A1<1,
以提高检测灵敏度。
实验过程中若出现 A1> A2 现象请将样本用提取液稀释成适当浓度.
2、好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。
3、此试剂盒仅适用于动物组织和动物血清(浆)。
葡萄糖氧化酶(GOD)测试盒 微量法 葡萄糖氧化酶(GOD)测试盒 微量法