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  • 结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒
产品名称:

结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2024-01-18
结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒:GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC3295
规格100管/96样供货周期现货
主要用途结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测

结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒

注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC3295

规格:100T/96S

 

产品内容:

提取液液体100mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:30mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存; 

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;

试剂四:粉剂×2瓶,4℃保存;临用前加入5mL试剂一充分混匀备用;

试剂五:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一充分混匀备用;

试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;临用前加入500μL双蒸水,充分溶解备用;

试剂七:液体250μL×2支,-20℃保存;

试剂八:液体12.5μL×2支;每支临用前加入溶解好的4mL试剂四。

反应液的配制:临用前在试剂二中加入14mL试剂一,缓慢加热,逐渐升温使其溶解,冷却后将其加入试剂三混合溶解。这样可以分两批配制并且测定。

 

产品说明:

    GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。

    GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比,通过340nm下测定NADPH的增加量,可以计算GBSS活性。

 

需自备的的仪器和用品:

    紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液制备 

    称取约0.1g组织加入1mL提取液,冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心10min,弃上清,在沉淀中加入1mL提取液充分混匀,置冰上待测。

二、测定步骤

    1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长340nm,蒸馏水调零。

    2、在EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μL)

测定管

样本

100

反应液Ⅰ

135

混匀,30℃保温20 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却

试剂八

75

混匀,30℃保温30 min,置沸水浴中1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 常温离心10min,取上清液(如果一次性测定样本较多,可以将试剂四、五和六按比例配成混合液)

上清液

150

试剂五

100

试剂六

5

试剂七

5

混匀后立即转移200μL微量石英比色皿或96孔板中, 340 nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。

注意:试剂二如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。

 

三、GBSS活性计算

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

1、按样本蛋白浓度计算:

    单位的定义:每mg组织蛋白在1mL反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

    GBSS活性(U/mg prot)= [ΔA÷(ε×d)×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每g组织在1mL反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS活性(U/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V测×109]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T= 432×ΔA÷W 。

V测:测量体积,0.26m L;V样:加入样本体积,0.1m L;V反总:反应体积,0.31mL;V上清:加入上清液体积,0.15mL;V提取:加入提取液体积,1×10-3 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×10-3mL/nmoL/cm;d:比色皿光径,1cm;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。

 

b.使用96孔板测定的计算公式如下:

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS活性(U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清) ÷T =720×ΔA÷Cpr。

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

 

2、按照样本鲜重计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。

GBSS活性(U/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V测]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清) ÷T=720×ΔA÷W。 

V测:测量体积,0.26m L;V样:加入样本体积,0.1m L;V反总:反应体积,0.31mL;V上清:加入上清液体积,0.15mL;V提取:加入提取液体积,1×10-3 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×10-3mL/nmoL/cm;d:比色皿光径,1cm;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g。

 

结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒订购说明:

1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。
5、请办理完货款后,将底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒运输说明:

极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。

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