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  • 丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒 微量法
产品名称:

丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒 微量法

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2020-08-06
丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒 微量法测定意义:PDH是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶,催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循环连接起来。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0385
规格100管/96样供货周期现货
主要用途丙酮酸脱氢酶活性测定应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒 微量法

货号:BC0385

规格:100T/96S

 

产品内容:

试剂一:110mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:1mL×1支,-20℃避光保存;

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×1支,4℃保存;

试剂五:粉剂×1支,-20℃保存;

试剂六:粉剂×1支,4℃保存;临用前加入1mL蒸馏水;

试剂七:粉剂×1支,4℃保存;

工作液的配制:临用前把试剂四、五、0.5mL六、七转移到试剂三中混合溶解待用。

 

产品说明:

     PDH(EC 4.1.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶,催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP,把糖酵解和三羧酸循环连接起来。

    PDH催化丙酮酸脱氢,同时还原2,6-二氯酚靛酚(2,6-DCPIP),从而导致605nm光吸收的减少。

 

需自备的仪器和用品

    可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、PDH的提取

    准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂二,用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨,4 ℃ 11000 g离心10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

  • 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长605nm,蒸馏水调零。
  • 每个样本需要180μL工作液,按样本数取出一定量的工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min。
  • 空白管:在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL水,混匀,立即记录605nm处初始吸光值A1和 1min后的吸光值A2,计算ΔA空白=A1-A2。
  • 测定管:在微量比色皿或96孔板中加入180μL工作液和10μL样本,混匀,立即记录605nm处初始吸光值A3和 1min后的吸光值A4,计算ΔA测定=A3-A4。
  •  

三、PDH活性计算

a.用微量比色皿测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T

=904.762×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/g 鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T=913.81×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/104 cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×500)÷T=1.828×(ΔA测定-ΔA空白)

V反总:反应体系总体积,1.9×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,2.1×104L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

 

b.96孔板测定的计算公式如下

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T

=1809.524×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/g 鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T=1827.62×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/104 cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=3.655×(ΔA测定-ΔA空白)

V反总:反应体系总体积,1.9×10-4 L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,21×103mol/L/cm;d:96孔板光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01 mL;T:反应时间,1 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

 

注意事项

1、测定过程中所有样本在冰上放置,以免变性和失活。

2、测定管的ΔA值在0.01-0.25之间,若测定管的ΔA值大于0.25,需将样本进行稀释。

相关文献:

 《Rare ginsenosides ameliorate lipid overload-induced myocardial insulin resistance via modulating metabolic flexibility.》 作者:Shuang Peng,Yilei Wang,Ying Zhou,Tingting Ma,Yapu Wang,Jia Li,Fang Huang,Junping Kou,Lianwen Qi,Baolin Liu,Kang Liu 期刊:Phytomedicine 影响因子:4.18 PMID:31005715

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1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
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3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
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5、请办理完货款后,将底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。


运输说明:

极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
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