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产品名称:

蛋白质提取试剂核蛋白抽提试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格: 320
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2020-04-17
蛋白质提取试剂核蛋白抽提试剂盒
货号:R0050
规格:50T/100T
本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约 60 分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号R0050
规格50T供货周期现货
主要用途细胞核蛋白提取试剂盒应用领域医疗卫生,化工,生物产业,农业,能源

蛋白质提取试剂核蛋白抽提试剂盒
货号 :R0050
规格 :50T/100T


产品内容 :

试剂盒组成  50T 100T
浆蛋白抽提试剂25ml 50ml
核蛋白抽提试剂5ml10ml
PMSF 300ul  1ml

保存 :核/浆蛋白抽提试剂 4℃保存,PMSF 于-20 ℃保存。


产品简介:
    本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约 60 分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。 得到的蛋白可以用于 Western blot 等实验。 本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂,释放出胞浆蛋白,再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提 50/100 个样品(每个样品约 2×10 6 个 Hela 细胞,40mg)。


操作方法 :
    裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
    一 、 对于体外培养细胞 :
    1.根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入 PMSF,使 PMSF 的终浓度为 1mM。PMSF需现用现加,若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸,可以在两种蛋白抽提液中加入 DTT 终浓度 0.5mM。
    2.对于贴壁细胞,去除培养液,用 PBS 洗一遍,用细胞刮刀收集细胞,或用 EDTA 消化后吹打下细胞(好不用胰酶硝化,以免胰酶消化目的蛋白) 。500 g 离心 2~3 分钟收集细胞,吸尽上清留下沉淀备用。
    3.对于悬浮细胞:用 PBS 洗一遍,500 g 离心 2~3 分钟收集细胞,吸尽上清,留下细胞沉淀备用。
    4.每 20ul 细胞沉淀加入 200ul 浆蛋白抽提试剂(2×10 6 个细胞沉淀约 20ul 或 40mg) 。
    5.用移液器吹打或高速涡旋 15 秒(可适当延长) ,必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
    6.冰浴 10 分钟。
    7.高转速剧烈涡旋 10 秒,4℃ 12000~16000g 离心 10 分钟。
    8.上清即为抽提得到的细胞浆蛋白,立即吸取上清预冷的样品管中备用,进行后续的 PAGE、Western 等实验,但蛋白浓度较低,可根据需要进行相应浓缩。
    9.沉淀即为细胞核,要完全吸尽残余的上清(避免细胞浆蛋白的污染) ,加入 50-100ul 核蛋白抽提试剂。
   10.用移液器吹打或高速涡旋 15 秒(可适当延长)沉淀完全分开,冰浴 10 分钟。
   11.高转速剧烈涡旋 10 秒,4℃12000~16000g 离心 10 分钟。
   12.立即吸取上清预冷的样品管中,此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。


对于组织样品:
    把组织称重后,尽可能切成非常细小的碎片,按每 50mg 组织加入 200ul-500ul PBS,用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液,500 g 离心 2~3 分钟收集细胞,吸尽上清,收集沉淀。加入 200ul 浆蛋白抽提试剂后接上述步骤 5。


注意事项
    1.裂解得到的蛋白样品,由于含有较高浓度的去垢剂干扰,不能用 Bradford 法测定蛋白浓度,可以选用本公司生产的 BCA 蛋白定量试剂盒(货号 PC0020)测定蛋白浓度。
    2.对于组织样品,本试剂盒适用于新鲜组织,对冻存组织抽提效果较差。
    3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


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蛋白质提取试剂核蛋白抽提试剂盒

 

 

参考文献:
《Proanthocyanidins Protect against β-Hydroxybutyrate-Induced Oxidative Damage in Bovine Endometrial Cells》 作者:Xi Cheng 1,?OrcID, Shuhua Yang 1,?, Chuang Xu 2, Lanzhi Li 1, Yi Zhang 1, Yang Guo 1, Cai Zhang 3, Peng Li 1,* , Miao Long 1,* OrcID and Jianbin He 3,* 期刊:Molecules 影响因子:3.098 PMID:30678309
《The protective role of Nrf2-Gadd45b against antimony-induced oxidative stress and apoptosis in HEK293 cells》 作者:XingkangJiang,ZeshengAn,ChaoLu,YueChen,EDu,ShiyongQi,KuoYang,ZhihongZhang,YongXu 期刊:Toxicology letters 影响因子:3.166 PMID:27208483
《Lactobacillus plantarum NA136 improves the non-alcoholic fatty liver disease by modulating the AMPK/Nrf2 pathway》 作者:Zijian Zhao,Chao Wang ,Li Zhang,Yujuan Zhao,Cuicui Duan,Xue Zhang,Lei Gao,Shengyu Li 期刊:Applied microbial and cell physiology 影响因子:3.67 PMID:31115630
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影响因子:3.361 PMID:30502652
《l-Proline Alleviates Kidney Injury Caused by AFB1 and AFM1 through Regulating Excessive Apoptosis of Kidney Cells》 作者:Huiying Li , Songli Li, Huaigu Yang ,Yizhen Wang , Jiaqi Wang , and Nan Zheng 期刊:Toxins 影响因子:3.895 PMID:30995739
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