蛋白质提取试剂核蛋白抽提试剂盒

蛋白质提取试剂核蛋白抽提试剂盒
货号 ：R0050
规格 ：50T/100T

产品内容 ：

保存 ：核/浆蛋白抽提试剂 4℃保存，PMSF 于-20 ℃保存。

产品简介：
    本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约 60 分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。 得到的蛋白可以用于 Western blot 等实验。 本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。本试剂盒可以抽提 50/100 个样品（每个样品约 2×10 6 个 Hela 细胞，40mg）。

操作方法 ：
    裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
    一 、 对于体外培养细胞 ：
    1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入 PMSF，使 PMSF 的终浓度为 1mM。PMSF需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入 DTT 终浓度 0.5mM。
    2．对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用 EDTA 消化后吹打下细胞（好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白） 。500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
    3．对于悬浮细胞：用 PBS 洗一遍，500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
    4．每 20ul 细胞沉淀加入 200ul 浆蛋白抽提试剂（2×10 6 个细胞沉淀约 20ul 或 40mg） 。
    5．用移液器吹打或高速涡旋 15 秒（可适当延长） ，必须使细胞沉淀*分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散不*会导致蛋白产量降低。
    6．冰浴 10 分钟。
    7．高转速剧烈涡旋 10 秒，4℃ 12000～16000g 离心 10 分钟。
    8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清预冷的样品管中备用，进行后续的 PAGE、Western 等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
    9．沉淀即为细胞核，要*吸尽残余的上清（避免细胞浆蛋白的污染） ，加入 50-100ul 核蛋白抽提试剂。
   10．用移液器吹打或高速涡旋 15 秒（可适当延长）沉淀*分开，冰浴 10 分钟。
   11．高转速剧烈涡旋 10 秒，4℃12000～16000g 离心 10 分钟。
   12．立即吸取上清预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。

对于组织样品：
    把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每 50mg 组织加入 200ul-500ul PBS，用匀浆器冰上匀浆制成细胞悬液，500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入 200ul 浆蛋白抽提试剂后接上述步骤 5。

注意事项 ：
    1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用 Bradford 法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的 BCA 蛋白定量试剂盒(货号 PC0020)测定蛋白浓度。
    2．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。
    3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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参考文献：
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《The protective role of Nrf2-Gadd45b against antimony-induced oxidative stress and apoptosis in HEK293 cells》 作者:XingkangJiang,ZeshengAn,ChaoLu,YueChen,EDu,ShiyongQi,KuoYang,ZhihongZhang,YongXu 期刊:Toxicology letters 影响因子:3.166 PMID:27208483
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