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产品名称:

辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-05
辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒
货号:BC0310
规格:50管/24样
NAD(H)是糖酵解和 TCA 循环的主要氢受体, 生成的 NADH 经呼吸电子链传递把电子交给氧, 在合成 ATP的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0310
规格50管/24样供货周期现货
主要用途辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒 


产品简介 :
    NAD(H)是糖酵解和 TCA 循环的主要氢受体, 生成的 NADH 经呼吸电子链传递把电子交给氧, 在合成 ATP的同时,形成大量的 ROS,同时 NADH 再生为 NAD。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD 比值的高低可用于评价糖酵解和 TCA 循环的强弱。
    较高的 NAD(H)及 NADH/NAD 比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态,NADH/NAD 比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循环。另外,NAD 降解产物具有非常重要的调控作用。
NAD 和 NADH 在 254 nm 下有吸收峰,利用高效液相色谱法在相应波长下测定其含量。


试验中所需的仪器和试剂:
    高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器(水系,50 个,0.22µm) 、滤膜(水系和有机系各 2 个,0.45µm) 、C18 柱(4.6 ×150 mm) 、可调式移液器、样品瓶(50 个,2mL) 、乙腈(120 mL) 、甲醇(色谱级,300 mL) 、蒸馏水
注:若用自动进样器,需要样品瓶,测定时将不少于 1mL 的样品或标准品加入样品瓶中。无自动进样器,需手动进样时,不需要样品瓶,用进样针将不少于 20ul 的样品或标准品打入进样阀。


产品内容 :
    试剂一:粉剂 1×1 瓶,粉剂 2×1 瓶,4℃保存;临用前用少量蒸馏水将粉剂 1 和粉剂 2 溶解后倒入容量瓶中,用蒸馏水定容 100mL,形成 NAD 和 NADH 提取液(注:试剂瓶中的粉剂要冲洗干净),4℃保存3 个月;
    试剂二:粉剂 1×1 瓶,粉剂 2×1 瓶,粉剂 3×1 瓶,4℃保存;临用前用少量蒸馏水将粉剂 1、粉剂 2 和粉剂 3 溶解后倒入容量瓶中,用蒸馏水定容 1000mL,形成流动相缓冲液基质(注:试剂瓶中的粉剂要冲洗干净), 4℃保存 3 个月。
    试剂三:NAD 标准品 5mg×1 支,-20℃保存。加入 1mL 试剂一,配成 5mg/mL 溶液,现配现用,用不完的试剂-20℃保存。
    试剂四:NADH 标准品 5 mg×1 支,-20℃保存。加入 1mL 试剂一,配成 5mg/mL 溶液,现配现用,用不完的试剂-20℃保存。


操作步骤 :
一 、 实验前的准备工作 :
    1. 将双蒸水 1000 mL、流动相缓冲液基质 1000 mL、甲醇 300 mL 和乙腈 120 mL 用 0.45µm 的滤膜抽滤,以除去溶剂中的杂质,防止堵塞色谱柱。(注:双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤,乙腈用有机系滤膜抽滤)。
    2. 流动相的配制:将抽滤完毕的流动相缓冲液基质 1000 mL 与乙腈配比为 9:1(v/v),即取 900mL缓冲液基质与 100 mL 乙腈混合。[每个样品需要约 12mL 流动相,流动相用量(mL)=12mL×样品数量+跑基线用量(约 50mL),流动相的用量请根据样品数量用多少配多少]。
    3. 将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成 100%的甲醇, 10%的甲醇,双蒸水各 250 mL。
    4. 将 2 和 3 中的溶剂超声 30 分钟,以脱去溶剂中的气泡,防止堵塞色谱柱。
二 、 辅酶 NAD(H) Ⅰ 的提取 :
    组织的处理:准确称取组织重量,按重量体积比(g/mL)加 9 倍试剂一,提取 NAD 和 NADH,制成10%匀浆。20000 g/min 离心 30 min,取上清液用 0.22µm 水系针头式过滤器过滤后待测,同时测定组织蛋白含量。
    细胞处理:收集于 60 mL 细胞,离心菌体经高压冷冻干燥 12 h 后,加入 2 mL 试剂一。超声破壁细胞(950 W,30%,15 min,工作 1 s,间隔 2 s),再经 10,000r 4℃高速离心 40s,上清用 0.22µm 水系微孔滤膜过滤后直接上柱检测。


三 、 辅酶 NAD(H) Ⅰ 含量测定操作步骤 :
     1. 开启电脑、检测器和泵,安装上色谱柱,打开 empower 软件,在方法组中设置进样量 20 µL,流速 0.8mL/min,保留时间 15min,检测波长 254nm,设置完毕保存方法组。
     2. 用 100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱 30min。
     3. 用流动相洗柱子,待基线稳定后开始加样。
     4. 加入标准品 20 µL,在 15min 内可分离 NAD 和 NADH, NAD 的保留时间在 3min 左右,NADH 的保留时间在 7min 左右(柱子不同,保留时间有差异),计算不同浓度的 NAD 和 NADH 标准品的峰面积。
     5. 加入样品 20 µL,在相应保留时间处检测 NAD 和 NADH 的峰面积。


辅酶 NAD(H) Ⅰ 含量的计算 :
1. NAD  含量的计算
NAD 标准曲线的绘制:
    将 5mg/ml 的 NAD 标准品用双蒸水分别稀释成 110 µg/ml、80 µg/ml、50 µg /ml、和 20 µg /ml 的 NAD标准品溶液,计算不同标准品溶液的峰面积。
计算标准曲线公式为: y = 25069χ- 26754(χ 为 NAD 浓度,µ g/ml;y 为峰面积)
推出:χ=(y + 26754)÷25069(χ 为 NAD 浓度,µg/ml;y 为峰面积)
NAD 含量(µg/mg prot)=(样品峰面积+26754)÷25069÷蛋白浓度(mg/mL)
NAD 含量(µg/g mass)=(样品峰面积+26754)÷25069÷样本鲜重(g/mL)
2. NADH 含量的计算
NADH 标准曲线的绘制:
    将 5mg/ml 的 NADH 标准品用双蒸水分别稀释成 200 µg/ml、 150 µg/ml、 100 µg/ml 和 50 µg/ml 的 NADH标准品溶液,计算不同标准品溶液的峰面积。
计算标准曲线公式为: y = 13275χ+35717(χ 为 NADH 浓度,µ g/ml;y 为峰面积)
推出:χ=(y – 35717)÷13275(χ 为 NADH 浓度,µ g/ml;y 为峰面积)
NADH 含量(µg/mg prot)=(样品峰面积 - 35717)÷13275÷蛋白浓度(mg/mL)
NADH 含量(µg/g 鲜重)=(样品峰面积 - 35717)÷13275÷样本鲜重(g/mL)
注:标准品的稀释倍数要根据样品中 NAD 和 NADH 浓度确定,样品中 NAD 和 NADH 的峰面积必须落在不同浓度的 NAD 和 NADH 标准品的峰面积之内,该标准曲线紧供参考。

相关文献:

《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu, Pengsong Li,Lei Zhang, Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影响因子:3.67 PMID:30673809
《α-Mangostin Alleviated Lipopolysaccharide Induced Acute Lung Injury in Rats by Suppressing NAMPT/NAD Controlled Inflammatory Reactions》 作者:Mengqing Tao,1Jia Jiang,Lin Wang,Yan Li, Qingcheng Mao, Jiyang Dong, and Jian Zuo 期刊:Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 影响因子:1.984 PMID:30405740
《FK866 inhibits the epithelial?mesenchymal transition of hepatocarcinoma MHCC97?H cells》 作者:Bin Zhang Dongmei Shi Xiangyu Zhang Guanzhao Liang Weida Liu Sen Qiao 期刊:Oncology Letters 影响因子:1.871 PMID:
《Involvement of the two l-lactate dehydrogenase in development and pathogenicity in Fusarium graminearum》 作者:Wenchan ChenLingling WeiYu ZhangDongya ShiWeichao RenZhihui ZhangJin WangWenyong ShaoXiali LiuChangjun ChenEmail authorQingli Gao 期刊:Curr Genet 影响因子:3.464 PMID:30474697
《Modulating acetate ester and higher alcohol production in Saccharomyces cerevisiae through the cofactor engineering》 作者:Kun-Qiang Hong,Xiao-Meng Fu,Sheng-Sheng Dong,Dong-guang Xiao,Jian Dong 期刊:J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 影响因子:2.993 PMID:30969383
《Metabolomics Analysis Reveals Therapeutic Effects of α-Mangostin on Collagen-Induced Arthritis in Rats by Down-regulating Nicotinamide Phosphoribosyltransferase》 作者:Kui Yang,Qin Yin,Qingcheng Mao,Sheng Dai,Lin Wang,Jiyang Dong,Jian Zuo 期刊:Inflammation 影响因子:2.939 PMID:30484004
 

辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒 订购说明:

1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 
3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 
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