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  • 辅酶ⅡNADP(H)含量试剂盒
产品名称:

辅酶ⅡNADP(H)含量试剂盒

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-10
辅酶ⅡNADP(H)含量试剂盒
货号:BC1100
规格:50管/24样
NADP + 和NADPH 含量测定可以计算 NADP(NADPH + NADP + )含量和 NADPH/NADP + 比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。 NADPH/NADP + 比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在 PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC1100
规格50管/24样供货周期现货
主要用途辅酶ⅡNADP(H)含量检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

辅酶ⅡNADP(H)含量试剂盒


产品简介 :
    NADP + 和 NADPH 含量测定可以计算 NADP(NADPH + NADP + )含量和 NADPH/NADP + 比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。 NADPH/NADP + 比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在 PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
    分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NADP + 和 NADPH。NADPH 通过 PMS 的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm 下检测吸光值,从而测定 NADPH 含量。利用 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP + 为 NADPH,从而检测 NADP + 含量。


试验中所需的仪器和试剂:
   可见分光光度计或酶标仪、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿或酶标板、研钵、冰和蒸馏水。


产品内容 :

酸性提取液:50mL×1 瓶,4℃保存;
碱性提取液:50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:基质缓冲液 15 mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,-20 ℃保存,用时加入 4mL 双蒸水,混匀;
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 4mL 双蒸水,混匀;
试剂四:粉剂×1 支,4 ℃保存,用时加入 4mL 双蒸水,混匀;
试剂五:液体 1.8mL×1 支,4 ℃保存;
试剂六:液体 30mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂七:液体 50mL×1 瓶,4 ℃保存。


操作步骤 :
一 、NADP  和 和 NADPH  的提取 :
1、血清(浆)中 NADP 和 NADPH 的提取:
    取 0.1mL 血清(浆),加入 0.9mL 酸性提取液,煮沸 5min;冰浴中冷却后,10000g 4℃离心 10min;

    取上清液另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和;10000g 4℃离心 10min,取上清液冰上保存供测定 NADP + 含量。
    取 0.1mL 血清(浆),加入 0.9mL 碱性提取液,煮沸 5min,冰浴中冷却后,10000g 4℃离心 10min,取上清液另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,10000g 4℃离心 10min,取上清液冰上保存供测定 NADPH 含量。
2、组织中 NADP 和 NADPH 的提取:
    称取约 0.1g 组织, 加入 0.9mL 酸性提取液, 冰浴研磨, 煮沸 5min, 冰浴中冷却后, 10000g 4℃离心 10min,取上清液另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,10000g 4℃离心 10min,取上清液冰上保存供测定 NADP + 含量。
    称取约 0.1g 组织, 加入 0.9mL 碱性提取液, 冰浴研磨, 煮沸 5min, 冰浴中冷却后, 10000g 4℃离心 10min,取上清液另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,10000g 4℃离心 10min,取上清液冰上保存供测定 NADPH 含量。
3、细胞或细菌中 NADP 和 NADPH 的提取:
    先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加入 0.9mL 酸性提取液,超声波破碎 1min(强度20%,超声 2s,停 1s),煮沸 5min,冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液另一新的离心管中,加入等体积的碱性提取液使之中和,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液冰上保存供测定 NADP + 含量。
    先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内,弃上清,加入 0.9mL 碱性提取液,超声波破碎 1min(强度20%,超声 2s,停 1s),煮沸 5min,冰浴中冷却后,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液另一新的离心管中,加入等体积的酸性提取液使之中和,10000g 4 ℃离心 10min,取上清液冰上保存供测定 NADPH 含量。


二 、 测定步骤( 在 在 1.5mLEP  管中按下表依次加样 ) :

试剂名称 测定孔(µL)
样本 50
双蒸水 
试剂一250
试剂二 75
试剂三75
试剂四 75
试剂五35
对照管可以只做一个,不需每一个样品都多一个对照。充分混匀后,室温避光静置 40min
试剂六 500
充分混匀,静置 5min 后,20000g,4℃离心 5min,弃上清,沉淀中加入
试剂七 1000

混匀,570nm 下比色。

 

注意事项
    1、若用比色皿测,沉淀用试剂七溶解后必须立即测。好加一个测一个。
    2、若用酶标板测,也必须在测定时再加试剂七,加入 1000µL 试剂七溶解沉淀,混匀后,取 300µL 酶标板中,立即测定。
    3、不可将试剂一、二、三和四混合后再加,必须分开加。


三 、NADP + 和 和 NADPH  含量的计算 :
  (一)NADP+含量的计算
1、血清(浆)中 NADP + 含量计算
   NADP + 含量(µmol/L)= (测定管 OD 值-0.047)×376
2、组织中 NADP + 含量计算
   (1)按样本蛋白浓度计算
NADP + (µmol/g prot)= (测定管 OD 值-0.047)×37.6÷样本蛋白浓度(g/L)
   (2)按样本鲜重计算
NADP + (µmol/g mass)= (测定管 OD 值-0.047)×37.6÷样本鲜重(g/L)
3、细胞或细菌中 NADP + 含量计算
   (1)按样本蛋白浓度计算
NADP + (µmol/g prot)= (测定管 OD 值-0.047)×37.6÷样本蛋白浓度(g/L)
   (2)按细菌或细胞密度计算
NADP + (µmol/10 4 cell)= (测定管 OD 值-0.047)×37.6÷细菌或细胞(10 4 cell /L)
(二)NADPH 含量的计算
1、血清(浆)中 NADPH 含量计算
   NADPH 含量(µmol/L)= (测定管 OD 值-0.047)×855
2、组织中 NADPH 含量计算
   (1)按样本蛋白浓度计算
    NADPH (µmol/g prot)= (测定管 OD 值-0.047)×85.5÷样本蛋白浓度(g/L)
   (2)按样本鲜重计算
   NADPH (µmol/g mass)= (测定管 OD 值-0.047)×85.5÷样本鲜重(g/L)
3、细胞或细菌中 NADPH 含量计算
   (1)按样本蛋白浓度计算
   NADPH (µmol/g prot)= (测定管 OD 值-0.047)×85.5÷样本蛋白浓度(g/L)
   (2)按细菌或细胞密度计算
   NADPH (µmol/10 4 cell)= (测定管 OD 值-0.047)×85.5÷细菌或细胞密度(10 4  cell /L)。

相关文献:

《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu, Pengsong Li,Lei Zhang, Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影响因子:3.67 PMID:30673809
 

辅酶ⅡNADP(H)含量试剂盒

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