考马斯亮蓝法测蛋白含量测定

考马斯亮蓝法测蛋白含量测定

货号：YW2
规格：50T/48

产品简介 ：
    样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
    在酸性溶液中，考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在 595nm 处有大吸收峰，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。

    聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(即vitamin B2)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)

    SDS－PAGE是在要电泳的样品中加入含有SDS和β-巯基乙醇(或者DTT)的样品处理液，SDS可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质的四级结构。SDS还与蛋白质结合使蛋白质－SDS复合物上带有大量的负电荷，这时各种蛋白质分子本身的电荷*被SDS掩盖。这样电泳时，就消除了各种蛋白质本身电荷及结构上的差异，电泳速度只是与蛋白质分子量有关。用本法测定蛋白质的分子量只需根据待测蛋白质在已知分子量的标准蛋白质图中的位置，就能得知分子量。

试验中所需的仪器和试剂：
     酶标仪、酶标板、移液器和蒸馏水。

产品内容 ：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 瓶，4℃保存。

操作步骤 ：
一 、 样品中可溶性蛋白质提取 ：
    液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。
    组织样品：准确称取约 0.1 g 样品，加 1mL 提取液（ 自备，根据需要可以是酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水） ，冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。 （动物样品常常需要稀释）
二 、 吸光值测定 ：
    1. 分光光度计仪预热 30 min 以上，调节波长到 595nm，蒸馏水调零。
    2.  空白 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL  蒸馏水， 1000µL 试剂一， 混匀后室温静置 10min， 于 595nm测定吸光度，10~20min 内完成测定，记为 A 空白管。
    3.  标准 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL  标准液， 1000µL 试剂一， 混匀后室温静置 10min， 于 595nm测定吸光度，10~20min 内完成测定，记为 A 标准管。
    4.  测定 管：取 1mL 玻璃比色皿板，加入 200µL  待测液，1000µL 试剂一，混匀后室温静置 10min，于595nm 测定吸光度，10~20min 内完成测定，记为 A 测定管。
蛋白质含量 计 算 ：
   C 待测（µg/m L）= C 标准管×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)=50×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)
   C 标准管：标准品蛋白质浓度，50µg/mL。

注意事项 ：
    1．加考马斯亮蓝后，在 10~20min 内吸光值相对较稳定，因此须在 10~20min 完成比色。
    2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，测完成后立即用 95%乙醇冲洗。
    3．测定前用 1~2 个样做预实验，确保蛋白浓度在 0~100µg/ml 范围内，否则需要做相应稀释。

考马斯亮蓝法测蛋白含量测定订购说明：

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运输说明：

1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝的箱子（保温效果少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
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