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产品名称:

双荧光素酶报告基因检测试剂盒 基因工程

产品品牌: 索莱宝 价格:
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-19
双荧光素酶报告基因检测试剂盒 基因工程
报告基因检测,是真核基因表达调控研究的常用方法。由于检测光量子的方法非常敏感,采用生物发光(bioluminescent) 法,是报告基因检测Z常用的有效手段。荧光素酶(luciferase) 催化底物荧光素的转化,发射出光子。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号D0010
规格100T供货周期一周
主要用途双荧光素酶报告基因检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

双荧光素酶报告基因检测试剂盒 基因工程
产品 说明 :
    报告基因检测,是真核基因表达调控研究的常用方法。由于检测光量子的方法非常敏感,采用生物发光(bioluminescent) 法,是报告基因检测常用的有效手段。荧光素酶(luciferase) 催化底物荧光素的转化,发射出光子。萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海肾荧光素酶(Ranilla luciferase) 催化的发光反应,具有相似的光学特征和很好的浓度线性范围(7~8 个数量级的线性范围) ,酶的检测灵敏度达 10 -18 mol 到 10 -20 mol,
但两者催化的化学反应底物和适反应条件完全不同。这两种荧光素酶配合形成了十分有效的双荧光素酶报告基因系统,其中 Ranilla luciferase 通常作为内参照。
    本试剂盒提供了一体化形式的双荧光素酶检测系统。采用通用裂解缓冲液,适合于两种荧光素酶活性的保持,且与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容;优化的两种酶反应体系,使每种发光反应持续数十分钟, 以便于手工操作多个样品; 并保证 Firefly luciferase 发光及时淬灭, 不影响后续 Ranilla luciferase的测定;优化的反应体系还使两种荧光素酶活性比值趋于合理的敏感范围,更有利于后续数据的比较。


产品内容:
名称  数量  保存条件
5x Universal Lysis Buffer (通用裂解液) 25 ml  -20 ℃
Fassay Buffer I (虫酶缓冲液)  10 ml  -20℃
Fassay Substrate I (虫酶底物)  0.5 ml  -20℃
Rassay Buffer II ( 海酶缓冲液)  10 ml  -20℃
Rassay Substrate II ( 海酶底物)  0.2 ml  -20℃
可作 100 次双荧光素酶检测。低温运输,-20 ℃或-80 ℃避光保存。有效期 6 个月。
洚备试剂 :
PBS、双蒸水等。


操洽步骤 :
一 、 裂解细胞 :
1) 新鲜配制裂解液:临用前,取适量 5xUniversal Lysis Buffer (ULB),用双蒸水稀释 1xULB ,混匀。1xULB 可在 4℃存放数周。
2) 细胞清洗:倾去培养板/皿中的培养液,加入足量 PBS ,轻轻洗涤细胞。完全倾去洗涤液。
3) 细胞裂解:推荐按照表中的体积,在孔/皿中加入 1xULB ,混匀。培养板可在微型振荡器上震荡 5~10min ;培养皿可直接用细胞刮刀刮下细胞,将细胞悬液移入 1.5 ml 离心管,在涡旋振荡器上充分混悬震荡30 秒。裂解细胞悬液可直接用于发光测定,也可离心 30 秒,取上清做发光测定。
表:不同容器细胞所需 1xULB 的体积。
96 孔板 48 孔板 24 孔板 12 孔板 6 孔板 35 mm 平皿 60 mm 平皿
30µl  60µl  120µl 250µl 500µl  500µl  1000µl


二 、 配制发光反应液 :
测定前,在室温待 Fassay Buffer I 、Fassay Substrate I 、Rassay Buffer II 和 Rassay Substrate II 溶化,混匀(注意避光)。按 20/1 比例用 Fassay Buffer I 稀释 Fassay Substrate I ,按 50/1 比例用 Rassay Buffer II稀释 Rassay Substrate II,分别配制所需体积的 Fassay Reagent I 和 Rassay Reagent II (注意避光)。


三 、 测定仪器的设置 :
按仪器操作说明开启发光测定仪。手动操作型仪器,将测读时间设为 10~20 秒。自动操作型仪器,一般将测定延迟设为 2 秒,将测读时间设为 10~20 秒,Fassay Reagent I 和 Rassay Reagent II 的注入体积设定为 100 µl。


四 、 手动发光测定 :
取待测样品 20 µl 加入测量管底部,取 Fassay Reagent I 100 µl 加入管底部,轻轻敲击管壁 3~5 次混匀,放入仪器中立即测定,记录发光值为 Firefly luciferase 的发光单位(RLU) ;
取 Rassay Reagent II 100 µl 加入管底部,轻轻敲击管壁 3~5 次混匀,放入仪器中立即测定,记录发光值为 Ranilla luciferase 的发光单位(RLU) 。如用多孔板同时手动测定多个样品,则将各待测样品 20 µl 分别加入连续的各孔底部,用多道加样器于各孔底加入 Fassay Reagent I 100 µl,轻轻敲击板侧 3~5 次混匀,放入仪器中立即测定,记录发光值为 Firefly luciferase 的发光单位(RLU) ;取 Rassay Reagent II 100 µl 立即加入管底部, 轻轻敲击板壁3~5次混匀, 放入仪器中立即测定, 记录发光值为Ranilla luciferase的发光单位(RLU) 。


五 、 自动发光测定 :
配制好的 Fassay Reagent I 和 Rassay Reagent II 置于测定仪内并连接好对应管道, Fassay Reagent I 接*注射管道,Rassay Reagent II 接第二注射管道。各待测样品 20 µl 分别加入测定管/板孔底部,启动自动测量程序。记录 Firefly luciferase 和 Ranilla luciferase 的发光单位(RLU) 。


注意事项 :
1) Fassay Buffer I 和 Fassay Substrate I 应避免反复冻熔,可分装成合适体积分次使用。Rassay Substrate II溶液应盖严存放, 避免蒸发。 配制好未用完的 Fassay Reagent I 和 Rassay Reagent II 可在-20℃保存 1 月左右。
2) 细胞裂解液一般在当天测定。如需隔日测定,应将样品于-20℃保存。长期保存应在-80℃。测定样品量可为 10~30µl。
3) 用多孔板同时手动测定多个样品时,要尽量保证每个样品的两种试剂加入时间间隔*。
4) Rassay Reagent II 可用于直接测定样品的 Ranilla luciferase 。需要注意的是,Rassay Reagent II 直接测量的 RLU 要比双荧光素酶顺序检测获得的 RLU 高一些(反应体积等因素的影响)。

相关文献:

《Long non-coding RNA MBNL1-AS1 regulates proliferation, migration, and invasion of cancer stem cells in colon cancer by interacting with MYL9 via sponging microRNA-412-3p》 作者:Kongxi Zhu,Yunxia Wang,Lan Liu,Shuai Li,Weihua Yu 期刊:Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology 影响因子:2.807 PMID:31255531
《Effects of Srxn1 on growth and Notch signalling of astrocyte induced by hydrogen peroxide》 作者:Lan Li, Guangjun Lin, Huizi Gu, Lei Yu & Changwei Ni 期刊:Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 影响因子:4.462 PMID:31079497
 

双荧光素酶报告基因检测试剂盒 基因工程

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