6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量

6-磷酸葡萄糖酸
脱氢酶（6PGDH）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC2105
规格: 100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前配制，加入2.2 mL试剂一，混匀；

2. 试剂三：临用前配制，加入2 mL试剂一，混匀。

产品说明：
磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）依次催化NADPH合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP⁺生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP⁺没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 试剂二和试剂三须现配现用，当天未用完试剂保存在4℃，可保存1周。

2. 样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在提取当日完成酶活性测定，粗酶液避免反复冻融；

3. 若样本初始（0s）读值大于0.5且ΔA测定小于0.1，可尝试将样本进行稀释后测定。

4. 使用96孔板测定时，可根据样本数量将试剂一（预热后）、二、三预混为工作液，因是根据反应速率计算酶活，为保证每个样本的反应时间尽量一致不推荐同时测过多样本。

实验实例：

1. 称约0.1g肾脏组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清稀释5倍，用微量石英比色皿测得计算ΔA测定=A2测定-A1测定=0.4866-0.3035=0.1831，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.0325-0.0269=0.0056，按样本质量计算酶活得：6PGDH酶活性(U/g 质量) =536×(ΔA测定-ΔA空白)÷W×5（稀释倍数）=4757 U/g 质量。

相关发表文献：

1. Wu S, Wang H, Li Y, et al. Transcription factor YY1 promotes cell proliferation by directly activating the pentose phosphate pathway[J]. Cancer research, 2018, 78(16): 4549-4562.

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