品牌 | SOLARBIO/索莱宝 | 货号 | BC0715 |
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规格 | 100管/96样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | α-KGDH酶活测定 | 应用领域 | 生物产业 |
α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法
货号:BC0715
规格:100T/96S
产品内容:
试剂一:液体110mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体1mL×1支,-20℃保存;
试剂三:液体22mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1支,4℃保存;
试剂五:粉剂×1支,4℃保存;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂七:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂八:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加入0.8mL双蒸水充分混匀待用,用不完的试剂仍-20℃保存。
工作液的配制:临用前把试剂四、试剂五、试剂六、试剂七转移到试剂三中混合溶解待用。
产品说明:
α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、α-KGDH的提取
称取约0.1g组织或收集约500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂二,冰浴用匀浆器或研钵充分研磨,4 ℃ 11000 g离心10min,取上清,置冰上待测。
α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法
二、测定步骤
2. 空白管:
取200μL工作液加入微量石英比色皿或96孔板中,37℃孵育5min后取出比色皿,再依次加入8μL试剂八和12μL蒸馏水,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A1,37℃准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A2,计算ΔA空白=A2-A1。
3.测定管:
取200μL工作液加入微量石英比色皿或96孔板中,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min后取出比色皿,再依次加入8μL试剂八和12μL样本,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A3,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A4,计算ΔA测定=A4-A3。
三、α-KGDH活性计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T=1473.7×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
α-KGDH(U/g 鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T=1488.5×(ΔA测定-ΔA空白)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
α-KGDH活性(U/104 cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500)÷T=2.977×(ΔA测定-ΔA空白)
V反总:反应体系总体积,2.2×10-4L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.012 mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。
α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T=2456.2×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。
α-KGDH活性(U/g 鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T=2480.7×(ΔA测定-ΔA空白)÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活性单位。
α-KGDH活性(U/104 cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=4.962×(ΔA测定-ΔA空白)
V反总:反应体系总体积,2.2×10-4L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.6cm;V样:加入样本体积,0.012 mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01 mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意事项:
相关文献:
《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
期刊:Planta 影响因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影响因子:3.571 PMID:29845188
α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法订购说明:
1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。
2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。
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5、请办理完货款后,将底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。
α-酮戊二酸脱氢酶活性检测试剂盒 微量法
运输说明:
极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。
常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。