植物花色苷含量检测试剂盒 微量法

植物花色苷含量检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC1385
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

产品说明：
花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。
根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
 可见分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照样本质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g样本，加入1mL提取液），充分匀浆后转移到EP管中，提取液定容至1mL，盖紧后60℃浸提30min，期间可震荡数次。12000rpm，常温离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，可见分光光度计蒸馏水调零。

2. 加样表：在96孔板中分别加入

充分混匀后测定测定管1和测定管2分别在530nm和700nm处的吸光度，测定管1在530nm和700nm处的
吸光值记为A1、A1’，测定管2在530nm和700nm处的吸光值记为A2、A2’，计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。


注意事项：

1. 如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1mL不变，如10μL上清液和180μL试剂一（相当于稀释20倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如100μL上清液和100μL试剂一（相当于稀释2倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；注意应同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入计算公式中。

2. 因提取液会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算需用PBS单独提取后自行测定。

实验实例：

1. 取0.1g葡萄皮加入1mL提取液充分匀浆后转移到EP管中，封口膜封口防止挥发，60℃浸提30min，期间可震荡数次，提取后提取液定容至1mL，离心取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）=（0.573-0.060）-（0.120-0.060）=0.453，按样本质量计算含量得：花色苷含量（μmol/g质量）=0.062×ΔA×F÷W =0.062×0.453×10÷0.1=2.81μmol/g 质量。

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