植物组织果糖含量检测试剂盒 微量法

植物组织果糖（FT）含量检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC2455
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
试剂一：10mg 果糖。临用前加1mL蒸馏水溶解，得到10mg/mL的果糖标准液，2-8℃保存两周。
产品说明：
果糖是一种最为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中，能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品生产中。
在酸性条件下果糖与间*二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。


技术指标：
低检出限：0.065 mg/mL
线性范围：0.5-35 mg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约0.05g样本，常温研碎；加入0.5mL提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；置于80℃水浴锅中10min（盖紧，以防止水分散失），振荡3~5次，冷却至室温后，4000g，常温离心10min，取上清；加入少量（约2mg）试剂四，80℃脱色30min（盖紧，以防止水分散失）；再加入0.5mL提取液，4000g，常温离心10min，取上清液测定。
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、试剂一的稀释：取200μL 10mg/mL果糖标准液，加入300μL蒸馏水，充分混匀，配制成4mg/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要30μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、样本测定（在1.5mL EP管中依次加入下列试剂）：

涡旋混匀，置于80℃水浴锅中准确反应10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中测定480nm处光吸收值，记为A空白管、A标准管、A测定管，并计算ΔA测定=A测定管-A空白管、ΔA标准=A标准管-A空白管。标准管和空白管只需测1-2次。

注意事项：
如果样本吸光值大于1.1，建议将样本用提取液稀释后进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。
参考文献：
[1] Varandas S, Teixeira M J, Marques J C, et al. Glucose and fructose levels on grape skin: interference in Lobesia botrana behaviour[J]. Analytica chimica acta, 2004, 513(1): 351-355.
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