滤纸酶检测试剂盒 微量法

滤纸酶（FPA）活性检测试剂盒
说明书
微量法
货号：BC2655
规格：100T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 滤纸条：常温防潮保存。

2. 标准品：10mg无水*萄糖。临用前加入1 mL蒸馏水溶解，配成10 mg/mL 葡萄糖溶液备用，2-8℃保存两周。

产品说明：
纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖一类酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系。以不溶性纤维素如滤纸为底物测定的纤维素酶称为滤纸酶，研究滤纸酶活力对纤维素酶总体酶活力的研究的有着重要意义。
FPA水解滤纸产生还原糖，还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成在540 nm有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540 nm处吸光值变化可计算得FPA活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、超声破碎仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管（2 mL）。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
三、FPA活性计算

1. 标准曲线的绘制：

2. 根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。

3. FPA活性的计算：

（1）按蛋白浓度计算
酶活定义：每mg蛋白每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。
FPA酶活（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）÷T=0.0333x÷Cpr
（2）按样本质量计算
酶活定义：每g样品每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。
FPA酶活（U/g 质量）=x×V提取÷W÷T=0.0333x÷W
（3）按照细胞或细菌数量计算
酶活定义：每10⁴个细胞每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。
FPA酶活（U/10⁴ cell）=x×V提取÷细胞数量（万个）÷T=0.0333x÷细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：每mL样本每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。
FPA酶活（U/mL）=x×V样÷V样÷T=0.0333x
V提取：提取液（蒸馏水）体积，1 mL；V样：加入的样本体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间，30 min。
注意事项：

1. 用干净的镊子取出滤纸条，带手套将滤纸条卷成小卷放入Ep管底部。

2. 当A或ΔA超过1时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。

3. 显色结束吸取检测液时注意枪头不要碰到滤纸条，以免带入毛状物，影响测定结果。

实验实例：

1. 取0.1g平菇伞部加入1mL蒸馏水，冰浴匀浆后于4℃，12000 rpm离心10 min，取上清置于冰上待测。之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.744-0.536=0.208，带入测得标准曲线y=1.0495x-0.1471，计算x=0.3384，按样本质量计算酶活得：

FPA酶活（U/g质量）=x×V提取÷W÷T=0.0333x÷W=0.113 U/g质量。
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