总果胶含量检测试剂盒抗氧化BC1400-50T/24S-北京索莱宝科技有限公司

品牌	SOLARBIO/索莱宝	CAS	详询
分子式	详询	纯度	详询
分子量	详询	货号	BC1400
规格	50T/24S	供货周期	现货
主要用途	总果胶含量检测	应用领域	环保,化工,生物产业,农林牧渔,综合

总果胶含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号：BC1400
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液一	液体110 mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液体70 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体60 mL×1瓶（自备）	2-8℃保存
试剂二	液体3 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂三	液体5 mL×1瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

试剂一：自备浓硫酸。
标准品：10 mg半乳糖醛酸，临用前加入0.943 mL提取液二，配成50 μmol/mL的标准液。

产品说明：
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶（原果胶或碱溶性果胶）。果胶是一种天然高分子化合物，具有良好的胶凝化和乳化稳定作用，已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，与原有的可溶性果胶进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530nm处有特征吸收峰。
技术指标：
低检出限：0.0237 μmol/mL
线性范围：0.0625-1.5 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
将组织样本捣碎，按照样本质量(g)和提取液一体积(mL)为1: 20的比列（建议取约0.05g样本，加入1mL提取液一），置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，取出冷却后于5000g、25℃离心10min，去掉上清，沉淀中再加入1mL提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入1mL提取液二，置于90℃恒温水浴锅中水解1h，取出冷却后于8000g、25℃离心15min，取上清液待测。
二、测定步骤

分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。
标准品的制备：将50μmol/mL 标准液用提取液二稀释为1.5、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 μmol/mL的标准溶液备用。
操作表：

试剂名称	空白管	标准管	对照管	测定管
样本（μL）	-	-	100	100
标准品（μL）	-	100	-	-
蒸馏水（μL）	100	-	-	-
试剂一（μL）	800	800	800	800
混匀、90℃放置10min，取出后冷却
试剂二（μL）	-	-	100	-
试剂三（μL）	100	100	-	100
混匀，25℃静置30min后测定530nm处吸光值，分别记为A空白管、A标准管、A对照管和A测定管。ΔA标准=A标准管-A空白管，ΔA测定=A测定管-A对照管。

三、总果胶含量的计算

标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

总果胶含量的计算：

总果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液二÷W=x÷W
V提取液二：加入提取液二的体积，1mL；W：样本质量，g。
注意事项：

浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热、冷却后再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

实验实例：

取0.05g苹果果肉进行样本处理，取上清液5倍稀释后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A测定管-A对照管=0.34-0.05=0.29，依据标准曲线y=0.7498x+0.017，计算x=0.364，按样本质量计算：总果胶含量(μmol/g 质量)= x×5（稀释倍数）÷W=36.4 μmol/g 质量。

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