Caspase-1活性测定试剂盒 比色法

Caspase-1活性检测试剂盒说明书
比色法
货号：BC3810
规格：20T、50T、100T
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：分装-20℃保存。

2. 试剂二：分装-20℃保存。

3. 标准液：pNA标准溶液，5 mmol/L。标准溶液在4℃条件下为浑浊状态，溶解即可变为澄清状态，不影响使用。

4. 标准品稀释液配制：取9 mL试剂一加入1 mL试剂二，充分混匀待用。（也可按照试剂一：试剂二=9:1的比例，自行配制）。

产品说明：
Caspase是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-1是可剪切 IL-1b和IL-18前体产生活性细胞因子的caspase。Caspase-1通过剪切Bcl-XL调节细胞凋亡，并通过对细胞因子前体的剪切来调控相关细胞因子介导的免疫炎性反应。基于Caspase-1特异水解多肽底物Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilide (YVAD-pNA)，释放的游离硝 基苯胺pNA在405 nm有最大吸收峰。采用可见光光度比色法测定pNA而得到Caspase活性。适用于检测哺乳动物组织、细胞Caspase-1活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、100μL玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体的操作步骤请见“产品资料"文件

注意事项：
1、由于试剂二一中含有还原剂（DTT），建议将样品用水稀释2倍后，用Bradford法测定蛋白浓度，以降低DTT对蛋白浓度测定的干扰。不建议使用BCA法测定蛋白浓度。
2、Caspase活性测定值低最常见的原因是细胞未发生凋亡或细胞量太少，其次是观测时间不恰当。诱导凋亡时，并非剂量越大时间越长Caspase活性就越高。建议设置不同剂量和时间点如0、2、4、8、16、24小时，以检测最佳的观察点。
3、所测样本的值高于标准曲线，可用试剂二稀释样本后重新测定。
4、盖紧96孔板盖子并用封口膜密封。37ºC孵育，肉眼可见颜色变黄时的OD405值约为0.2，此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜，但酶活性较强时，孵育时间过长将导致反应失去线性关系。
相关发表文献：

1. Ren N, Jiang T, Wang C, et al. LncRNA ADAMTS9-AS2 inhibits gastric cancer (GC) development and sensitizes chemoresistant GC cells to cisplatin by regulating miR-223-3p/NLRP3 axis[J]. Aging (Albany NY), 2020, 12(11).

2. Chai D, Qiu D, Zhang Z, et al. Ab sent in melanoma 2 enhances anti‐tumour effects of CAIX promotor controlled conditionally replicative adenovirus in renal cancer[J]. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2020.

3. Liao T, Ding L, Wu P, et al. Chrysin Attenuates the NLRP3 Inflammasome Cascade to Reduce Synovitis and Pain in KOA Rats[J]. Drug Design, Development and Therapy, 2020, Volume 14:3015-3027.

参考文献：

1. Cohen GM. Caspases: the executioners of apoptosis. Biochem J, 1997, 326: 1-16.

2. Janicke R U, Sprengart M L, Wati M R, et al. Emerging role of caspase-3 in apoptosis[J]. Cell Death and Differentiation, 1999, 6:99-104.

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