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  • 柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒 三羧酸循环
产品名称:

柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒 三羧酸循环

产品品牌: 索莱宝 价格: 1560
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-10
柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒 三羧酸循环
CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环*个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。CS 催化乙酰CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB 转变成黄色的TNB,在 412nm 处有特征吸光值。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC1060
规格25管/12样供货周期现货
主要用途柠檬酸合酶(CS)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒 三羧酸循环

产品名称:柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒

产品英文名:  Citrate Synthase(CS)Assay Kit

产品货号:BC1060                产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/24样      产品商标:solarbio
保存与运输:4保存或-20保存;            参考价格:2800
库存状态:现货                          
关键字:柠檬酸合酶试剂盒|柠檬酸合酶活性检测试剂盒| CS活性检测|试剂盒

简要介绍:
CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。CS 催化乙酰CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的DTNB 转变成黄色的TNB,在 412nm 处有特征吸光值。

产品详细描述

商品货号:商品品牌:规格基本售价:选择规格
BC1060-10管/5样Solarbio10管/5样900.00元
BC1060-25管/12样Solarbio25管/12样1560.00元
BC1060-50管/24样Solarbio50管/24样2800.00元


产品内容: 
提取液:液体 25mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,-20℃保存;
试剂二:液体 0.3mL×1 支,-20℃保存;
试剂三:液体 90mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×2 支,4℃保存,临用前加入 2mL 双蒸水,用不完的试剂仍 4℃保存;
试剂五:粉剂×4 支,-20℃保存,临用前加入 500μL 双蒸水,用不完的试剂仍-20℃保存; 试剂六:粉剂×2 支,-20℃保存,临用前加入 1.5mL 双蒸水,用不完的试剂仍-20℃保存;

产品说明: 
CS(EC 2.3.3.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,是三羧酸循环 个限速酶,是三羧酸循环主要调控位点之一。 CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶 A,进一步水解产生柠檬酸;该反应促使无色的 DTNB 转变成黄色的 TNB,在 412nm 处有特征吸光值。
试验中所需的仪器和试剂: 可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

操作步骤:

  • 样本前处理 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 提取液和 10μL 试剂二,用冰浴匀浆器或研 钵匀浆。
2 将匀浆液 600g,4℃离心 5min。
3 将上清液移另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。
4 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 CS。
5 在沉淀中加入 200μL 试剂一和 2μL 试剂二,反复吹打充分混匀,用于 CS 测定。
6 柠檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。
二、测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长 412nm,蒸馏水调零。
2、试剂三置于 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)水浴中预热 10min 左右(保证无沉淀)。
3、操作表: 在 1mL 玻璃比色皿中分别加入

试剂名称(μL)测定管对照管
试剂三860930
试剂四3535
试剂五35 
样本3535
试剂六35 

将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中,加试剂六的同时开始计时,记录 412nm 波长下 10 秒时的初始吸光度 A1,之后迅速将比色皿连同反应液一起放入 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物 种)水浴中准确反应 2 分钟;迅速取出比色皿并擦干,412 nm 下记录 2 分 10 秒时的吸光度 A2,上 清液、沉淀的测定管、对照管均需测量(每个样本需测 4 管)。 计算上清液的测定管ΔA1=A2-A1,上清液对照管的ΔA1’=A2-A1,沉淀的测定管ΔA2=A2-A1, 沉淀的对照管ΔA2’=A2-A1,计算ΔA 上清=ΔA1-ΔA1’,计算ΔA 沉淀=ΔA2-ΔA2’。

注意事项: 
1、测定过程中样本和所有试剂在冰上放置,以免变性和失活。
2、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃,取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏 水,将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
3、两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。
三、CS 活性计算: 
1、组织中 CS 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃或 25℃下每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义 为一个酶活力单位。
CS 上清(U/mg prot)=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷(Cpr 上清×V 样本)÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀(U/mg prot)=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷(Cpr 沉淀×V 样本)÷T =1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS(U/mg prot)=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:37℃或 25℃下每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一 个酶活力单位。 CS 上清(U/g 鲜重)=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样本÷V 提取)÷T =1050×ΔA 上清÷W  CS 沉淀(U/g 鲜重)=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样本÷V 沉淀)÷T =212×ΔA 沉淀÷W CS(U/g 鲜重)=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷W+212×ΔA 上清÷W。
2、细菌或培养细胞中 CS 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃或 25℃下每 mg 蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一 个酶活力单位。 CS 上清(U/mg prot)=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷(Cpr 上清×V 样本)÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀(U/mg prot)=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷(Cpr 沉淀×V 样本)÷T=1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS(U/mg prot)=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。
(2)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:37℃或 25℃下每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol 5TNB 定 义为一个酶活力单位。 CS 上清(U/10 4 cell)=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷(500×V 样本÷V 提取)÷T=2.1×ΔA 上清 CS 沉淀(U/10 4 cell)=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷(500×V 样本÷V 沉淀)÷T =0.4242×ΔA 沉淀 CS(U/10 4 cell)=CS 上清+CS 沉淀=2.1×ΔA 上清+0.4242×ΔA 沉淀。
 ε:TNB 的消光系数,13.6×10 -3mL/(nmol·cm);V 反总:反应体系总体积,1mL;d:比色 皿光径,1cm;V 样本:加入的样本体积,0.035mL;V 提取:提取液体积,1mL;V 沉淀:溶 解沉淀的总体积,0.202mL;T:反应时间,2min;Cpr 上清:上清液的蛋白浓度,mg/mL;Cpr 沉淀:沉淀溶解后的蛋白浓度, mg/mL;W:样本鲜重,g。
柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒 三羧酸循环
相关文献:
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《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448

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