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  • α-酮戊二酸脱氢酶活性测定试剂盒 三羧酸循
产品名称:

α-酮戊二酸脱氢酶活性测定试剂盒 三羧酸循

产品品牌: 索莱宝 价格: 700
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-09
α-酮戊二酸脱氢酶活性测定试剂盒 三羧酸循:α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0710
规格50管/48样供货周期现货
主要用途α酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

α-酮戊二酸脱氢酶活性测定试剂盒 三羧酸循

货号:BC0710

规格:50T/48S

 

产品内容:

试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体0.6mL×1支,-20℃保存;

试剂三:液体55mL×1瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×1支,4℃保存;

试剂五:粉剂×1支,4℃保存;

试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;

试剂七:粉剂×1支,-20℃保存;

试剂八:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加入2mL双蒸水充分混匀待用,用不完的试剂仍-20℃保存。

工作液的配制:临用前把试剂四、试剂五、试剂六、试剂七转移到试剂三中混合溶解待用。

 

产品说明:

    α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。

    α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。

 

需自备的仪器和用品

    紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、α-KGDH的提取

     称取约0.1g组织或收集约500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂二,冰浴用匀浆器或研钵充分研磨,4 ℃ 11000 g离心10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到340 nm,蒸馏水调零

2. 空白管:

取1mL工作液加入1mL石英比色皿,37℃孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL蒸馏水,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A1,37℃准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A2,计算ΔA空白=A2-A1。

3.测定管:

取1mL工作液加入1mL石英比色皿,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL样本,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A3,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A4,计算ΔA测定=A4-A3。

三、α-KGDH活性计算

1.按样本蛋白浓度计算

     单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

     α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T=1473.7×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

2.按样本鲜重计算

     单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

     α-KGDH(U/g 鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T=1488.5×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

3. 按细菌或细胞密度计算

    单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

    α-KGDH活性(U/104cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500)  ÷T=2.977×(ΔA测定-ΔA空白)

    V反总:反应体系总体积,1.1×10-3 L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.06mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

 

注意事项

1、测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性和失活。

2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃,取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

3、两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。

4、测定管的ΔA值在0.01-0.25之间,若测定管的ΔA值大于0.25,需将样本进行稀释。

相关文献:

《Inhibition of?α?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影响因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影响因子:3.571 PMID:29845188
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448
 

α-酮戊二酸脱氢酶活性测定试剂盒 三羧酸循

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