TEV蛋白酶 酶、辅酶

TEV蛋白酶 酶、辅酶
货号：TEVDAB-1000U
规格：1000u
品牌：solarbio

别名 : rTEV 
英文名称 : rTEV 
储存条件 : -70℃/-20℃ 
单位 : 支 
外观（性状） : 冻干粉

产品说明：
    rTEV蛋白酶(重组型)是经过基因工程改造后的重组蛋白酶，该酶特异性识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe- Gln-Gly七氨基酸序列。rTEV蛋白酶与肠激酶U(EK)、Thrombin、Factor Xa、SUMO等蛋白酶相比，具有高活性、高特异性的双重特点，rTEV蛋白酶因具有高剪切活性和特异性，已成为融合蛋白表达后去除融合tag的*蛋白酶。该酶经6×His标签纯化而得(含组氨酸标签)，纯度达99％，剪切反应完毕后可通过Ni-NTA Resin(Cat.No.P2010, Solarbio)去除。该酶在2-8℃-30℃温度、pH范围(6.0-8.5)反应条件下均具有活性

活性定义: 在1XrTEV Buffer(50 mM，pH8.0, 0.5 mM EDTA, 1mM DTT)，30℃反应1h，剪切>85％的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

保存条件: 长期储存-70℃，可储存1年，-20℃，可储存6个月。
 

    该酶经 6×His 标签纯化而得(含组胺酸标签)，纯度达99％， 剪切反应完毕后可通过His标签纯化树脂Ni-NTA Resin(Cat.No. P2010)去除，以达到纯化目的蛋白的目的。

表1. 不同温度下rTEV酶切活性

    影响天然TEV酶活性的常见因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响；2）Zn离子（＞5 mM）对rTEV活性有抑制；3）与半胱氨酸反应的试剂也是rTEV的潜在抑制剂。

    表达方式: A DNA sequence encoding the TEV Protease （NP_062908） （Gly 2038- Gly 2280） was fused with polyhistidine tag at the N-terminus, with a Ser 2256 Asn mutation 
种属:Human
表达宿主: E.Coli
QC Testing
纯度:> 95%, as determined by SDS-PAGE 
内毒素:< ﹤1.0 EU per 1μg cytokine as determined by the LAL method.
稳定性:Samples are stable for up to twelve months from date of receipt -70°C 
预测N端: Met 1 
分子量:The recombinant human TEV protease consists of 251 amino acids and has a predicted molecular mass of 28.6 kDa. As estimated in SDS-PAGE under reducing conditions. 
缓冲液: Supplied as a 0.2μm filtered solution of 50mM Tris, 10%Sucrose,5mM DTT pH8.0 
SDS-PAGE: 
Usage Guide
储存方法:Store it under sterile conditions at -70℃. It is recommended that the protein be aliquoted for optimal storage and usage. Avoid repeated freeze-thaw cycles. 

使用方法说明：
1. 推荐使用溶液：50 mM NaH2PO4, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 10%甘油，pH 8.0 buffer中进行剪切。
2. 250×rTEV Protease Buffer：250mM EDTA, 250 mM DTT, PH 8.0
3. rTEV 蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：100
4. 酶切体系：

融合蛋白 1000 μg
250×rTEV Protease Buffer 4μL
rTEV 蛋白酶 2μL
定容 1000μL
定容缓冲液：50 mM NaH2PO4, 150mM NaCl
5. 酶切条件：在 16℃酶切 6hr。用户可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索酶切条件，可适当加大酶量或延长酶切时间。
6. 可取少量样本进行 SDS-PAGE 分析，若要去除酶切后体系中的 rTEV 蛋白酶，可用 His 标签纯化树脂亲和层析。

TEV蛋白酶 酶、辅酶

参考文献：

《CRISPR-Cas9 Mediated RNase L Knockout Regulates Cellular Function of PK-15 Cells and Increases PRV Replication》 作者:Chao Sui, Dandan Jiang, Xiangju Wu, Xiaoyan Cong, Feng Li, Yingli Shang, Jinqiu Wang, Sidang Liu, Hu Shan, Jing Qi, and Yijun Du 期刊:BioMed Research International 影响因子:2.197 PMID:30941371

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