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产品名称:

羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒 氨基酸代谢

产品品牌: 索莱宝 价格: 420
厂商性质: 生产厂家 产品时间: 2019-12-05
羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒 氨基酸代谢
测定意义:HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

产品概述

品牌SOLARBIO/索莱宝货号BC0250
规格50管/48样供货周期现货
主要用途HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此应用领域医疗卫生,化工,生物产业,石油

羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒 氨基酸代谢

产品名称: 羟脯氨酸(HYP)含量检测试剂盒

产品英文名: Hydroxyproline(HYP) Content Assay Kit

产品货号:BC0250             产地:北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格:50管/48样          产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:420
库存状态:现货                          
关键字: 羟脯氨酸检测试剂盒|HYP检测试剂盒|羟脯氨酸|试剂盒

简要介绍:
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
    样品经水解产生游离的HYP,进一补被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基ben甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。


产品详细描述
产品内容:
提取液:6mol/L盐酸,自备。浓盐酸:H2OV/V= 1:1,室温保存。
试剂一:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃避光保存。
    标准品:液体1mL×1支,0.5mg/mL 羟脯氨酸标准品,4℃保存。
产品说明:
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基ben甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。
试验中所需的仪器和试剂:
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、6mol/L盐酸和蒸馏水。
操作步骤:
一、羟脯氨酸提取
1. 组织:称取约0.5g样品于玻璃管,将组织尽量剪碎以便消化,盖子稍松不密闭。加入5mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小时消化没有可见大的团块,16000rpm25℃,离心20min(若离心后仍有杂质,可通过过滤去除),10mol/LNaOH(约3mL)调节pH值6~8范围内。蒸馏水定容8mL,取上清待测。(过程中可能有黑色物质生成,若长时间不能消化,可能为碳化的物质)
2. 细胞:取500万个细胞,加入1mL的提取液,煮沸或110℃烘箱26小时消化透明状16000rpm25℃,离心20min,用10mol/LNaOH(约0.5mL)调节pH值6~8范围内。蒸馏水定容2mL,取上清待测。
二、测定操作:

  1. 将标准品稀释为157.53.751.8750.9380.4690.2340.117ug/mL的标准溶液。
  2. 按下表进行操作:

 

 对照管测定管标准管
样本(μL 200 
标准溶液(μL  200
试剂一(μL200200200
混匀,室温静置20min
试剂二(μL200200200
H2OμL600400400
混匀,60℃,20min,取出后室温静置15 min1mL比色皿,在560nm下分别测定对照管,测定管,标准管的OD值,并记为A对照管A测定管A标准管。


三、羟脯氨酸含量计算公式

  1. 标准曲线的绘制:

以标准溶液的浓度为x轴,∆A标准(∆A =A标准管-A对照管)为y轴,绘制标准曲线,得到方程y=kx+b。将∆A测定∆A =A测定管-A对照管)带入方程得到x

  1. 羟脯氨酸含量的测定:

1)按样本鲜重计算:
组织羟脯氨酸含量(µg/g 鲜重)= x×V样品÷W×V样品÷V组提)=8x÷W
2)按样本蛋白浓度计算:
组织羟脯氨酸含量(µg/mg prot= x×V样品÷Cpr×V样品)=x÷Cpr
3)按细菌或细胞密度计算:
细胞羟脯氨酸含量(µg/104 cell= x×V样品÷(细胞数量×V样品÷V胞提)=2x÷细胞数量。
V样品:加入的样品体积,0.2mLV组提:组织提取液体积,8mLV胞提:细胞提取液体积,2mLW:样本鲜重;细胞数量:以104计;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL
注意事项

  1. OD值大于1,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
  2. 试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。

     3、按样本蛋白浓度计算时,需单独提取样本中的蛋白质并测定。

 相关文献:

《Enhancement of the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells and cartilage repair by ghrelin》 作者:Litong Fan  Jiaqing Chen  Yanmeng Tao  Boon Chin Heng  Jiakuo Yu  Zheng Yang  Zigang Ge 期刊:Wiley Online Library 影响因子: PMID:30644571

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