谷氨酸合成酶(GOGAT)活性检测试剂盒 微量法

产品名称:：  谷氨酸合成酶(GOGAT)活性检测试剂盒 微量法

产品英文名:   Micro Glutamate Synthase（GOGAT）Assay Kit

产品货号：BC0075      产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：100管/96样        产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：1710
库存状态：现货                          
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简要介绍：
GOGAT分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。
    GOGAT催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸；同时NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体100ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20ml×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；
产品说明：
GOGAT分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。
GOGAT催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸；同时NADH氧化生成NAD⁺，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取：   
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。  
二、测定步骤：
分光光度计预热30min以上，调节波长340nm，蒸馏水调零。

1. 样本测定

（1）在试剂二中加入18mL试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用。
（2）在微量石英比色皿/96孔板中加入20µL样本和180µL试剂二，混匀，立即记录340 nm处20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
GOGAT活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/10⁴ cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.642×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GOGAT（nmol/min/10⁴ cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.072×ΔA
V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，0.6cm；V样：加入样本体积，0.02 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

相关文献：
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30558146
《Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis》 作者:Jie Wang, Wei Zhou,Hui Chen,Jiao Zhan, Chenliu He,and Qiang Wang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:30666245
《Altered gut microbiota and mucosal immunity in patients with schizophrenia.》 作者:Ruihuan Xua,Bingbing Wu,Jingwen Liang,Fusheng He,Wen Gu,Kang Li,Yi Luo,Jianxia Chen,Yongbo Gao,Ze Wu,Yongqiang Wang,Wenhao Zhou,Mingbang Wang 期刊:Brain Behav. Immun. 影响因子:6.17 PMID:31255682

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