Na+k+ ——ATP酶活性检测试剂盒 微量法

Na⁺ K⁺-ATP酶活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC0065
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂三：临用前取1支加1 mL蒸馏水溶解，现用现配。用不完的试剂-20℃分装保存一周。

2. 试剂六：用时加入5 mL蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。

3. 试剂七：用时加入5 mL蒸馏水，溶解后2-8℃保存两周。

4. 标准品：10 μmol/mL标准磷贮备液。将标准品20倍稀释，即取 0.1 mL标准品加1.9 mL蒸馏水充分混匀，配成0.5 μmol/mL标准磷应用液，现用现配。

5. 定磷剂的配制：按H₂O:试剂六:试剂七:试剂八=2:1:1:1（体积比）的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据实验用量现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
产品说明：
Na⁺K⁺- ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。
Na⁺K⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：
1、由于每一个样都必须做对照，本试剂盒100管保证测 48份Na⁺K⁺-ATP酶。
2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。
实验实例：

1. 取0.1g小鼠心脏加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清置冰上，之后用96孔板按照测定步骤操作，测得计算A测定=0.741，A对照=0.509，A标准=0.280，A空白=0.043，按样本质量计算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/g 质量)=7.5×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷W=73.42 U/g质量。

1. 取0.1g稗草加入1mL试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清置冰上，之后用96孔板按照测定步骤操作，测得计算A测定=0.275，A对照=0.239，A标准=0.280，A空白=0.043，按样本质量计算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力(U/g质量)=7.5×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷W=11.39 U/g质量。

1. 取100μL小鼠血浆检测，用96孔板测得A测定=1.114，A对照=1.054，A标准=0.280，A空白=0.043，按液体体积计算酶活得：

Na⁺K⁺-ATP酶活力（U/mL）=7.5×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）=1.90 U/mL。
相关发表文献：

1. Fangzhou Chen,Ying Zhao,Huizhao Chen,et aL. MicroRNA-98 reduces amyLoid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondriaL dysfunction through the Notch signaLing pathway via HEY2 in ALzheimer's disease mice. InternationaL JournaL of MoLecuLar Medicine. October 2018;(IF2.928)

[2] Wanxiu Cao,Jing Li,Yaoxian Chin,et aL. Transcriptomic anaLysis reveaLs effects of fucoxanthin on intestinal gLucose transport. JournaL of FunctionaL Foods. October 2018;(IF3.197)
[3] Li M, Jiang C, Zhang Y, et al. Activities of Amphioxus GH-like protein in osmoregulation: insight into origin of vertebrate GH family[J]. International journal of endocrinology, 2017, 2017.
参考文献：
[1] Luo L G, MacLean D B. Effects of thyroid hormone on food intake, hypothalamic Na/K ATPase activity and ATP content[J]. Brain research, 2003, 973(2): 233-239.
[2] Cornelius F. Modulation of Na, K-ATPase and Na-ATPase activity by phospholipids and cholesterol. I. Steady-state kinetics[J]. Biochemistry, 2001, 40(30): 8842-8851.
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