Western Blot常见问题及注意事项

WB常见问题常见问题解决对策及注意事项两快玻璃板之间灌胶,胶总是不平玻璃没有洗干净，应该要洗得非常干净过硫酸铵和TEMED的加量不合适，加量相对较多，凝胶凝固过快，也会造成胶不平现象加完试剂以后没有很好的摇匀，导致有些部位的聚合剂浓度过高，聚合相对较快造成胶不平胶总是漏避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损胶条一定要干，跑完电泳后，胶条就放在实验台上晾着。下面的胶条注意不要老化，如果有裂纹的话用保鲜膜垫在上面，也可以有效防止漏胶将两块玻板摆放*对齐，底部处于同一个平面膜上有明显气泡...

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蛋白印迹用缓冲液及洗涤液

转印缓冲液提供了电极之间的电连续性，其必须是导电的。它还提供了一个化学环境，能维持蛋白质的溶解度，又不妨碍转移过程中蛋白质吸附到膜上。传统的转印缓冲液包含缓冲系统和甲醇。Tris甘氨酸缓冲液，常用于槽转印系统中。这种缓冲液的pH值为8.3，比大多数蛋白的等电点（pI）要高。在凝胶上分离的蛋白质带负电荷，向阳极迁移。由于槽内的缓冲液是混合的，故转移过程中的离子分布保持相对恒定。在蛋白测序应用中，建议使用10mMCAPS缓冲液（pH=11）。凝胶电泳缓冲液中残留的甘氨酸导致蛋白测...

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尼龙膜、PVDF膜、NC膜区别

转印膜：用于蛋白质和核酸的转移和检验过程的微孔膜。Southernblot：又称Southern印迹杂交，是研究DNA图谱的基本技术。Northernblot：又称Northern印迹杂交，是检测RNA的基本技术。Westernblot：又称Western印迹杂交，是蛋白质检测分析的基本技术。转印膜在蛋白质和核酸的转移和检测过程中应用广泛，不同的转印膜规格和参数不同，选择正确、均一稳定的转印膜对达到的实验结果起到关键性的作用。常用的三种转印膜：硝酸纤维素膜（NC膜）、带正电的...

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实验室详解单克隆抗体的制备过程

单克隆技术又名杂交瘤技术。由G.KÖhler和Milstein1975年创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。单克隆抗体的制备过程主要有以下六个环节，具体为抗原指标、免疫动物选择、免疫程序的确定、免疫、细胞杂交与选择培养。单抗制备步骤1、抗原制备制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。2、免疫动物...

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Western/ELISA显色底物大盘点

一、HRP辣根过氧化酶是常见的酶促发光或显色的交联酶，由于HRP比活高、特异性更强、分子量小（40kD）、稳定性好和作用底物范围广的优点而得到广泛使用。HRP的底物种类有不少，主要可以分为化学发光底物和生色底物2大类:1.化学发光底物：化学发光底物主要考虑的是：发光信号强弱——发光信号当然越强越好，强发光信号持续的时间也是越长越好，还有就是背景低灵敏度高。原理：试剂中的发光物在辣根过氧化物酶的作用下发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经x光胶片(放射自显影片)感光...

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CTAB作用原理

物理性状呈白色或浅黄色结晶体粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水，震荡时产生大量泡沫。能与阴离子、非离子、两性表面活性剂有良好的配位性。具有优良的渗透、柔化、乳化、抗静电、生物降解性及杀菌等性能。作用原理CTAB是一种阳离子去污剂,可溶解细胞膜,具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性。它能与核酸形成复合物：在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3mol/LNaCl）时,从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB-核酸的复...

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二甲基亚砜配制及作用

二甲基亚砜物理性质二甲基亚砜，英文名称DMSO。无色粘稠液体。有吸湿性。能与水、乙醇、丙酮、乙醛、吡啶、乙酸乙酯、苯二甲酸二丁酯、二恶烷和芳烃化合物等任意互溶，不溶于乙炔以外的脂肪烃类化合物。二甲基亚砜用途广泛，可用作溶液和反应试剂。DMSO在有机合成，医药、电子等方面均有应用。二甲基亚砜的合成二甲基亚砜一般采用二甲硫醚氧化法制得，由于所用的氧化剂和氧化方式不同，因而有不同的生产工艺。甲醇二硫化碳法甲醇和二硫化碳为原料，以γ-Al2O3作催化剂，先合成二甲基硫醚，再与二氧化氮...

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红细胞裂解液的工作原理及配制方法

红细胞裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法，它能既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。那么红细胞裂解液的原理是怎么样的呢？裂解液作用原理血红细胞表面上有红细胞专属的表面抗原，当裂解液中含可以攻击特定红细胞表面抗原的酶的时候就只会造成红细胞的变形，生物通道扩大膨胀裂解，或者引起红细胞的变形，而不会攻击其他细胞；另外红细胞有自己的电负性，渗透脆性（通常是一些非酶细胞裂解液的突破点），悬浮稳定性，这都是区别于其他种类细胞的区别点。红细胞裂解液就是利用这些特性裂解红细胞的。另外红...

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